Annexin V-FITC/PI法的实验步骤：1，细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300g离心5min，弃上清，收集细胞，PBS洗涤细胞一次，轻轻重悬细胞并计数。2，取1-5×10^5重悬的细胞，300g离心5min，弃上清。用PBS洗涤细胞一次，离心后弃上清，加入500μL稀释的1×Annexin V Binding Buffer工作液重悬细胞。3，细胞悬液中加入...
加入5μL Annexin V-FITC,轻轻吹打混匀,加入5μL PI 轻轻吹打混匀,室温避光孵育5-15min。(PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高,时间允许,可以在检测前5分钟加入PI); 5 流式细胞仪检测或荧光显微镜观察。最好在1h内检测。 四、注意事项1Annexin V-FITC与PI量微,请在使用前低速离心将盖内壁上的液体甩...
1、Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒载体酶切:将表达质粒用限制性内切酶(同引物的酶切位点)进行双酶切,酶切产物行琼脂糖电泳后,用胶回收Kit或冻融法回收载体大片段。2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。(三) 获得含重组表达质粒的表达菌种 1、 将连接产物转化大肠杆菌DH5α...
Annexin V-FITC/PI细胞凋亡实验方法分为以下步骤：收集细胞，预冷洗涤，离心去除上清液，加入结合缓冲液，混合后加入Annexin V-FITC与PI，室温避光孵育，最后通过流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。实验过程中需注意Annexin V-FITC与PI的低温避光储存，PI的毒性防护，以及细胞密度、细胞消化时间、检测时间等细...
Annexin V-FITC 通常与细胞膜非渗透性核酸荧光染料联合使用以检测凋亡细胞。常用的染料是 PI。正常细胞和早期凋亡细胞的细胞膜是完整的,核酸染料 Propidium iodide(PI) 不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和坏死细胞,PI 能够透过细胞膜与细胞核结合呈现红色。
但在实际操作中，由于染料成本较高，通常无需在这一步为了调整机器而过多制备样品。未染色组：不加抗体 Annexin V单染组：将细胞置于55℃水浴中处理10分钟，或加入凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，随后加入5μl Annexin V-FITC。PI单染组：取一半细胞加入4%多聚甲醛（使细胞死亡），离心后用PBS洗涤，再与正常活细胞混合...
一、Annexin V/PI双染法Annexin V/PI双染法是基于生物学功能检测细胞凋亡的方法，即检测细胞膜完整性，可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测，目前流式是最常用的细胞凋亡检测方法之一。原理：Annexin V可与磷脂酰丝氨酸（PS）特异性结合，因此，可以作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。但Annexin...
f. 如果用于流式细胞仪检测,可立即上机检测,Annexin V-FITC 为绿色荧光, 碘化丙啶(PI)为红色荧光,流式检测细胞凋亡的效果及其验证请参考图 1 和图 2。 初次进行流式细胞仪检测时,建议选择一组适当的细胞参考图 2 设置未染色、 PI 单染和 Annexin V-FITC 单染这 3 个对照。如果用于荧光显微镜检测, 1000...
a)了解凋亡细胞的变化及检测方法。 b)了解FITC-AnnexinV/PI双染色法检测凋亡细胞的原理及方法。 二、实验原理 a)细胞凋亡是细胞内由多个基因控制的死亡程序被活化而导致的细胞自杀(cell suicide)。膜磷脂酰丝氨酸原来位于细胞膜的内部。在细胞凋亡早期,细胞膜上的膜磷脂酰丝氨酸外翻与AnnexinV结合,使其被染成绿色。
Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡实验方法 1.细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300×g离心5 min，弃上清，收集细胞，PBS洗涤一次，轻轻重悬细胞并计数。2.取1~5×105重悬的细胞，300×g离心5 min，弃上清。用PBS洗涤细胞一次，离心后弃上清，加入100 μL稀释的1×Annexin V Binding Buffer 重悬细胞。3.细胞悬液...