AnnexinV-APC和7-AAD双染色检测细胞凋亡 细胞功能实验—Annexin V-APC/7-AAD双染色检测细胞凋亡 1. 材料 1.1. 实验材料 所用基础培养基请根据所培养细胞需求确定。 1.2. 试剂配制 1.2.1 培养基配制 于基础培养基中,加入10%FBS,1%双抗,以及其他营养成分(个别细胞需要额外的营养因子,请参考细胞需求),轻轻混匀...
Annexin V-APC和7-AAD双染色检测细胞凋亡 细胞功能实验—Annexin V-APC/7-AAD双染色检测细胞凋亡 1. 材料 1.1. 实验材料 所用基础培养基请根据所培养细胞需求确定。1.2. 试剂配制 1.2.1 培养基配制 于基础培养基中，加入10%FBS，1%双抗，以及其他营养成分（个别细胞需要额外的营养因子，请参考细胞需求），...
细胞带绿色荧光（如：GFP）可以根据流式细胞仪的配置来选择合适的试剂盒：·流式细胞仪有DAPI通道，选择Annexin V-APC/DAPI(E-CK-A258）试剂盒；·流式细胞仪没有DAPI通道，选择Annexin V-APC/7-AAD(E-CK-A218)试剂盒。细胞带红色荧光（如mcherry/RFP）可以选择Annexin V-APC/DAPI(E-CK-A258)试剂盒。c...
2)再次需要考虑细胞是否自带荧光,因为感染病毒或质粒转染的细胞往往带 GFP 荧光,GFP 与 YF488/FITC 通道重叠,不能选择 YF488/FITC 标记的 Annexin V,此时如果只有 488 nm 一根激光管可以用 PE 标记 Annexin V,用 7-AAD 代替 PI,或者改用 YF647 Annexin V 代替 YF488。 3)最后还要考虑处理因素是否带有荧光...
3，细胞悬液中加入5μL的Annexin V-APC和5μL的7-AAD染色液。4，轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育15-20min。5，反应完成后立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于1小时内完成检测。实验时对照组凋亡比例高的原因 1，细胞状态不好;2，细胞收集后存放的时间太长，没有及时染色;3，细胞表面原有的...
7-AAD/ Annexin V染色技术的具体技术步骤是:前处理:将细胞按照一定浓度悬液处理,脱模;制备细胞:将上述悬液浓缩,放入比较宽的银杯中, or 5mL 毕氏管中; 加入染色液:加入适量的7-AAD指示染料,1μg/ml Annexin V-Fluorescein,10 mmol/L HEPES, pH7.4;拌匀:拌匀染色液,放置黑暗室或室外低温器中,静置15-30分...
7-AAD染色液适当分装后-5~-20℃可保存1年，其他试剂2~8℃可保存1年。Annexin V-PE禁止冷冻保存。实验原理 Annexin V-PE / 7-AAD荧光双染细胞凋亡检测试剂盒，可用于检测悬浮细胞和贴壁细胞的凋亡。Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸(PS) 有高度亲和力。当细胞发生凋亡时，膜内侧的磷脂...
AnnexinV-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒操作步骤: 、贴壁细胞的消化 ①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。 ②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5～2min, 不同的细胞消化时间有所不同。 ③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培...
Annexin V-APC的荧光最大激发波长652 m,最大发射波长670 m;7-AAD荧光最大激发波长546m,最大发射波长在647m。 上机检测前,须用待测细胞制备质控样本来设定流式细胞仪的荧光补偿和设置十字门的范围: (I) 未转染GFP等标记的细胞 ① 空白管:阴性对照组细胞,没有染色的细胞。不加Annexin V/APC,7-AAD。用于调...
因此,可以采用 AnnexinV 与7-AAD 双染的方法,通过流式检测细胞早期凋亡。 操作步骤:标记的 Annexin V 可结合流式细胞仪用于检测细胞外膜上的磷酯酰丝氨酸1.用去离子水按 1:4 稀释结合缓冲液(4ml 结合缓冲液+12ml 去离子水);2.用 4℃预冷的 PBS 洗细胞两次,用 250ul 结合缓冲液重新悬浮细胞,调节其浓度...