细胞凋亡检测实验步骤——流式检测 噗啦噗啦实验室 1.0万 0 flowjo对PI/Annexin V-FITC检测细胞凋亡的流式细胞术结果进行分析 Jingle进哥 4.2万 13 PI/Annexin V-FITC检测细胞凋亡之原理及注意事项 Jingle进哥 4180 0 医学生必备|细胞凋亡检测实验,PI染色,Hoechst染色,细胞增殖 酸菜教科研 7234 2 流式...
Annexin-V染色原理 凋亡早期，细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸（PS）从胞质转至胞外。Annexin-V（模联蛋白-V）。是一种磷脂结合蛋白，与PS有强亲和力。操作步骤（贴壁细胞为例）1、对照管的设置 1）空白管：诱导凋亡的细胞不加染料，用来调节电压；2）单染管：分别需要只加PI和荧光标记的Annexin V两个单染管，用来调...
Annexin V-FITC/PI法的实验步骤：1，细胞按照实验方案进行凋亡诱导，300g离心5min，弃上清，收集细胞，PBS洗涤细胞一次，轻轻重悬细胞并计数。2，取1-5×10^5重悬的细胞，300g离心5min，弃上清。用PBS洗涤细胞一次，离心后弃上清，加入500μL稀释的1×Annexin V Binding Buffer工作液重悬细胞。3，细胞悬液中加入...
6. 孵育结束后加入400 µL 1×Annexin V Binding Buffer，轻柔混匀后置于冰上。注意：染色后尽可能在30 min内通过流式细胞仪进行检测。使用491 nm和535 nm激发，517 nm（FITC通道）和617 nm（PE或PI通道）附近测量荧光。B. 荧光显微镜分析 1. 对于悬浮细胞：(1）按照步骤A.1到步骤A.6的流式细胞分析步骤...
Annexin V和PI双染组：同样进行55℃水浴处理或加入凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，之后分别加入5μl Annexin V和5μl PI。实验组：直接加入5μl Annexin V和5μl PI，室温下避光孵育10~15分钟，再加入400μl Binding Buffer，置于流式管中，半小时内进行检测。上机检测步骤：绘制两个散点图：图1的横坐标为FSC，纵...
3、实验步骤 一、试剂与仪器 1. 孵育缓冲液:10 mmol/L HEPES/NaOH,pH7.4,140 mmol/L NaCl,5 mmol/L CaCl2。 2. 标记液:将FITC- Annexin V(宝灵曼公司产品)和PI加入到孵育缓冲液中,终浓度均为1 ug/ml。 3. 流式细胞仪。 二、实验步骤 1. 细胞收集:悬浮细胞直接收集到10 ml的离心管中,每样本细胞...
将染色后的细胞样本放入流式细胞仪进行检测。在检测前，要确保流式细胞仪的参数设置正确，根据 Annexin V-EGFP 和 PI 的激发与发射波长，设置合适的激光和检测通道。一般 Annexin V-EGFP 用绿色荧光通道检测，PI 用红色荧光通道检测。检测完成后，利用专业的数据分析软件，如 FlowJo，对数据进行分析。通过绘制散点...
一、操作步骤(贴壁细胞为例)1.1 对照管的设置 1)空白管:诱导凋亡的细胞不加染料,用来调节电压; 2)单染管:分别需要只加 PI 和荧光标记的 Annexin V 两个单染管,用来调节补偿; 3)实验管:诱导凋亡的细胞加本次实验的所有荧光染料; 4)阴性管:正常培养细胞加入染料,确认细胞正常状态,排除假阳性1.2 细胞处理及...
图1 Annexin V/PI检测原理。实验流程：（1）收集细胞：在进行完细胞凋亡刺激后，用预冷的PBS洗涤细胞2次，4℃离心5min，（贴壁细胞使用不含EDTA的胰酶消化）；（2）重悬细胞：取1～5×105个重悬的细胞，离心弃掉PBS，加入Annexin V-FITC结合液轻轻重悬；（3）染色：加入Annexin V-FITC和PI Staining Solution，...
1)对于荧光染料的选择,建议如果流式细胞仪带有 488 nm 和 633 nm 两个或以上激光管,首先考虑用 APC 或 YF647 标记 Annexin V,因为它和 PI 通道几乎不用考虑光重叠问题,可以减少调节补偿的烦恼,如果只有 488 nm 激光管则可选择YF488/FITC 标记的 Annexin V。