PI/Annexin V-FITC检测细胞凋亡之原理及注意事项 Jingle进哥 4180 0 医学生必备|细胞凋亡检测实验,PI染色,Hoechst染色,细胞增殖 酸菜教科研 7234 2 流式细胞凋亡检测试验 舍为斯生物 4742 0 活死细胞双染步骤 安静基础科研实验外包 5165 0 TUNEL染色、PI染色、细胞增殖、细胞迁移,细胞凋亡检测实验 酸菜教科研...
2、选择Annexin-V的荧光染料时要考虑细胞的自发荧光，特别是培养时间久或药物处理的细胞，一定注意细胞代谢物药物本身的荧光，一般来说细胞代谢物的自发荧光会干扰FITC/PE，所以可建议用Annexin-V APC，药物的干扰可查看药物本身的发射光谱是否会对检测选择的染料有影响。3、细胞染色完成后，禁止固定，尽快检测完，可将...
上未染色管，调整FL1和FL2的电压，使细胞群落在图2的左下象限。上Annexin V单染管，调整补偿（FL2-% FL1），使细胞群落在图2的右下象限。上PI单染管，调整补偿（FL1-% FL2），使细胞群落在图2的左上象限。接下来，将Annexin V和PI双染管放入流式细胞仪中，观察细胞在四个象限的分布情况。若有必要，...
将Annexin V与PI联合使用，即可将处于不同凋亡时期的细胞区分开来：活细胞（Annexin V-/PI-）、早期凋亡细胞（Annexin V+/PI-）、晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Annexin V和PI结合染色呈现双阳性（Annexin V+/PI+）。图 Annexin V/PI检测原理 服务流程 服务流程 客户在线下单——订单/实验材料确认——细胞培养——...
2)单染管:分别需要只加 PI 和荧光标记的 Annexin V 两个单染管,用来调节补偿; 3)实验管:诱导凋亡的细胞加本次实验的所有荧光染料; 4)阴性管:正常培养细胞加入染料,确认细胞正常状态,排除假阳性1.2 细胞处理及染色 1)取对数生长期细胞接种于 6 孔板或 6cm 培养皿(用什么培养皿取决于所培养的细胞,保证最终收...
Annexin V/PI双染色法 原理 细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细...
染色失败,试剂失效。 在该实验中,Annexin V与PS结合是Ca2+依赖性的,由于实验中错误的添加金属螯合剂,如EDTA等,或者出现Ca2+盐溶液,PI试剂失效等问题,影响最后结果呈现。当然,我们也更换了新的试剂盒检测,依然是这样效果,貌似也说不通。 细胞丢失了。
实验的解决方法：先低速离心，吸取细胞培养板中的液体，留少许液体，加入适量PI和Annexin-V染色10min后，将漂浮细胞吸至离心管中，离心洗涤两次，用PBS漂洗贴壁细胞两次，加胰酶消化后将细胞悬液移至另一离心管中，离心洗涤，再与漂浮细胞合并后上流式细胞仪检测。应用该法可降低晚期凋亡和坏死比例，增加早期凋亡细胞...
在Annexin V-PI双染色法中,首先使用含有Annexin V荧光标记的染料将细胞进行染色,荧光显微镜下观察细胞,此时可以检测到细胞膜上的PS,以及处于早期凋亡的细胞;然后再加入PI染料,使其进入细胞内,此时可以检测到处于晚期凋亡的细胞。 通过对Annexin V和PI染色的细胞进行分析和计数,可以得到凋亡细胞的比例和分布情况。这种方...
10、再次上未染色的样本(空白),设置FITC和PI通道的电压,以使得所有的细胞均位于左下区域。 11、用Annexin V FITC单染的实验样本上机,调节FITC的电压和漏到PI通道的补偿,以便凋亡细胞出现在右下象限。 12、用PI单染的实验样本上机,调节PI的电压和漏...