PI/Annexin V-FITC检测细胞凋亡之原理及注意事项 Jingle进哥 4180 0 医学生必备|细胞凋亡检测实验,PI染色,Hoechst染色,细胞增殖 酸菜教科研 7234 2 流式细胞凋亡检测试验 舍为斯生物 4742 0 活死细胞双染步骤 安静基础科研实验外包 5165 0 TUNEL染色、PI染色、细胞增殖、细胞迁移,细胞凋亡检测实验 酸菜教科研...
2、选择Annexin-V的荧光染料时要考虑细胞的自发荧光，特别是培养时间久或药物处理的细胞，一定注意细胞代谢物药物本身的荧光，一般来说细胞代谢物的自发荧光会干扰FITC/PE，所以可建议用Annexin-V APC，药物的干扰可查看药物本身的发射光谱是否会对检测选择的染料有影响。3、细胞染色完成后，禁止固定，尽快检测完，可将...
PI为核酸染色剂,与细胞核结合将细胞核染为红色,PI不可透过正常的细胞膜,可透过凋亡中晚期以及坏死细胞的细胞膜,适用于在排除细胞坏死的前提下,细胞中晚期凋亡的检测。 在本次实验中,采用HeLa细胞的对照组和H2O2诱导组,将Annexin V与PI同时使用,通过流式细胞仪分群表征出正常、坏死、凋亡和机械性损伤的细胞群。 二...
2)单染管:分别需要只加 PI 和荧光标记的 Annexin V 两个单染管,用来调节补偿; 3)实验管:诱导凋亡的细胞加本次实验的所有荧光染料; 4)阴性管:正常培养细胞加入染料,确认细胞正常状态,排除假阳性1.2 细胞处理及染色 1)取对数生长期细胞接种于 6 孔板或 6cm 培养皿(用什么培养皿取决于所培养的细胞,保证最终收...
Annexin V/PI双染色法的缺点 1、制备贴壁细胞样品时，容易因消化和吹打造成细胞额外损伤，从而夸大了实验结果，增加了数据变异度。2、凋亡细胞的本底荧光或非特异染色的特性会增强，导致荧光飘移，导致定量不准。实验交付内容 1、所有实验的原始数据（包括实验过程、实验试剂与设备等）；2、检测报告与结果分析（流式...
图1 Annexin V/PI检测原理。实验流程：（1）收集细胞：在进行完细胞凋亡刺激后，用预冷的PBS洗涤细胞2次，4℃离心5min，（贴壁细胞使用不含EDTA的胰酶消化）；（2）重悬细胞：取1～5×105个重悬的细胞，离心弃掉PBS，加入Annexin V-FITC结合液轻轻重悬；（3）染色：加入Annexin V-FITC和PI Staining Solution，...
Annexin V是一种能够与PS结合的蛋白质,而且这种结合是钙依赖的。也就是说,只有在钙离子存在的情况下,Annexin V才能与凋亡细胞膜外层的PS结合。这种结合使得我们可以通过荧光显微镜观察到凋亡细胞的特定区域。 PI的加入:双重染色增强效果 🌈为了更准确地检测细胞凋亡,我们通常会使用两种染料:Annexin V和PI(碘化丙啶...
染色失败,试剂失效。 在该实验中,Annexin V与PS结合是Ca2+依赖性的,由于实验中错误的添加金属螯合剂,如EDTA等,或者出现Ca2+盐溶液,PI试剂失效等问题,影响最后结果呈现。当然,我们也更换了新的试剂盒检测,依然是这样效果,貌似也说不通。 细胞丢失了。
Annexin V/PI双染色法 原理 细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细...
2，细胞收集后存放的时间太长，没有及时染色;3，细胞表面原有的PS相对较多，应选用低浓度的AnnexinV标记;4，PBMC表面往往有血小板黏附在细胞表面，造成Annexin V阳性率偏高;5，过分吹打、震荡或胰酶消化等，可能使PS暴露出来。实验时处理组凋亡比例低的原因 1，凋亡刺激得不够;2，细胞本身生长状态可能对刺激因素不...