注意:没有一种内参蛋白,适用于所有样本的Western Blot,要根据自己的样本选择合适的内参。 洗涤▼▼ 洗涤缓冲液 建议使用TBST进行抗体稀释和洗涤。洗涤三次,每次5-10分钟。 对于图中所有抗体,TBST比PBST可以产生更强的信号。 二抗孵育▼▼ 较强的封闭剂稀释二抗可降低背景,建议用含5%脱脂奶粉的TBST稀释二抗。 如下...
Western Blot的第一步为蛋白提取,提取方法根据检测目标的类型可分为总蛋白提取、核蛋白提取、膜蛋白提取,对于大多数应用进行总蛋白提取即可。 总蛋白提取所需的试剂为:裂解液、蛋白酶抑制剂。 ▲裂解液 裂解液的成分主要有Triton X-100、NP-40、SDS等,不同裂解强度和实验应用范围的裂解液成分有所差别,裂解液的原...
其中,Southern blot作为“大哥”,是检测DNA的利器;Northern blot作为“二哥”,则专注于RNA的检测;而Western blot作为“小弟”,则是用来检测蛋白质的。至于那个不太常露面的Eastern blot,它是Western blot的一个变种,用于检测蛋白质上的特定修饰。 一、Southern Blot的探秘 Southern blot,或称为DNA印迹杂交,由英国生物...
一、转膜 这一步是将蛋白质转移至固相载体上,常用固相材料有NC膜、PVDF膜等。常用湿法或半干法转模。这一实验步骤中要戴一次性PE手套,防止手上的蛋白污染膜。 1、湿转 图2 湿法转印堆积层组装示意图 (1)转印缓冲液:Tris 5.8g、甘氨酸2.9g、10%(v/v)甲醇、SDS 0.37g、甲醇200ml使用蒸馏水定容至1L,pH 8....
Western Blot(WB),一般称为蛋白质印迹。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。
Western Blot(WB),一般称为蛋白质印迹。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。WB
蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)是将蛋白质经电泳分离后转移到膜上,然后利用抗体进行检测的技术。完整的WB流程,如下图所示,包含样本制备、SDS-PAGE、转膜、抗体结合、蛋白检测等5个大步骤。 样品制备 1、蛋白提取 1)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM。
免疫印迹(Western Blot) 采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。SDS-PAGE 可对蛋白质样品进行分离,转移到固相载体——例如硝酸纤维素薄膜(NC)上。固相载体可以吸附蛋白质,并保持电泳分离的多肽类型及...
一、原理 蛋白质免疫印迹法即Western Blot。 它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,基本原理是经过 PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体例如硝酸纤维素薄膜(NC膜)或PVDF膜上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。