一、Western blot(蛋白质印迹) 原理及服务 实验原理 蛋白质印迹法(免疫印迹试验)即Western Blot是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,是一种能对蛋白进行定性和半定量分析的方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳分离的细胞或生物组织样品中的蛋白条带进行着色,通过分析着色的位置和着色深度...
一、转膜 这一步是将蛋白质转移至固相载体上,常用固相材料有NC膜、PVDF膜等。常用湿法或半干法转模。这一实验步骤中要戴一次性PE手套,防止手上的蛋白污染膜。 1、湿转 图2 湿法转印堆积层组装示意图 (1)转印缓冲液:Tris 5.8g、甘氨酸2.9g、10%(v/v)甲醇、SDS 0.37g、甲醇200ml使用蒸馏水定容至1L,pH 8....
Western blot常常被我们叫做"玄学"，因为这门技术让人琢磨不透，很难做到结果可重复，明明上了相同体积...
图3、4 上样,80v电压 图5 蛋白maker分离 3、将胶置于电泳槽中,倒入电泳缓冲液,内部要漫过矮板,外部要漫过玻璃板底部; 4、准备样品 maker 于冰盒上,顺序排好,上样,并在实验本上记录好; 5、盖上电源盖,正负极相互对应,接通电源,恒压浓缩胶80V,30min或maker分离后可更改电压为120v,跑分离胶。待 loading...
图1 WB实验流程示意图 一、转膜 这一步是将蛋白质转移至固相载体上,常用固相材料有NC膜、PVDF膜等。常用湿法或半干法转模。这一实验步骤中要戴一次性PE手套,防止手上的蛋白污染膜。 1、湿转 图2 湿法转印堆积层组装示意图 (1)转印缓冲液:Tris 5.8g、甘氨酸2.9g、10%(v/v)甲醇、SDS 0.37g、甲醇200ml使...
在进行Western Blot检测时,明智的做法是一步一步地进行操作。要成功地进行Western Blot,每一步都不应该被忽视。包括:(1)WB缓冲液制备,(2)样品制备,(3)凝胶电泳,(4)蛋白转移,(5)封闭,(6)抗体培养,(7)WB检测与成像,(8)数据分析。 (图1 western blot大概的一个流程示意图)...
Western Blot实验原理 蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)是将蛋白质经电泳分离后转移到膜上,然后利用抗体进行检测的技术。完整的WB流程,如下图所示,包含样本制备、SDS-PAGE、转膜、抗体结合、蛋白检测等5个大步骤。 实验步骤 1. 样本制备 1)融解RIPA裂解液(RIPA裂解液-细胞/组织裂解液缓冲液),混匀。取适当量的裂解...
图 1. Western blot 的流程图[2]1.万丈高楼第一步：准备材料 要想实验节奏稳，准备工作那可要妥妥...
Western Blot实验的最后一步,是显影。拿到高特异性、低背景的显色图像,将为实验结论提供强有力的佐证。显色的原理是实验中的二抗被HRP(辣根过氧化物酶)标记,可采用增强化学发光法(ECL)。ECL灵敏度高、重复性好,是目前主流的WB显色方法。 图一、全自动化学...
一、实验简介 1. 蛋白质免疫印迹(Western Blot)是利用聚丙烯酰胺凝胶电泳,检测特定样品,或提取特定样品,或提取物种某种特定蛋白的方法。通过凝胶电泳按照分子量大小分离蛋白,再利用特异性抗体识别这些蛋白的技术。 2. 检测指标 样品是否表达某种蛋白;蛋白表达量有多少;蛋白有多大;蛋白时空变化;蛋白修饰鉴定等。