WB,是Western blotting的缩写,即蛋白质印迹法,又称免疫印迹(immunoblotting),也就通过电泳技术分离不同组分,再采用印迹技术将蛋白质转移(“印”)到特定的膜上,再利用抗原-抗体的特异性结合原理,用抗体作为探针去实现检测复杂样品中的靶标蛋白的方法,这项技术也可以用来检测不同时期蛋白表达的水平以及蛋白相互作用等...
抗体孵育:首先用特异性的一抗孵育膜,结合目标蛋白,然后用二抗(通常与酶或荧光染料标记)来检测一抗结合的目标蛋白。 信号检测:通过化学发光、荧光或比色法检测结合的二抗,从而识别目标蛋白,并分析其表达水平。 二、实验步骤 1. 样品准备 细胞裂解:使用适当的裂解缓冲液(例如RIPA缓冲液)裂解细胞,提取总蛋白。 蛋白质...
一、WB实验的基本原理:蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测的方法。一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志,检测蛋白质的方法很多,除 ELISA 法外,也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法。与Southern或Northern杂交方法...
一、实验原理 Western blot(也称为蛋白质免疫印迹)是一种常用于研究中分离和鉴定蛋白质的技术。它利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 来分离指定样品中包含的各种蛋白质,然后将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或 PVDF 膜上,接下来将膜与对感目标蛋白质的特异抗体一起孵育。在洗膜过程中,未结合的抗体被洗...
一、实验简介 1. 蛋白质免疫印迹(Western Blot)是利用聚丙烯酰胺凝胶电泳,检测特定样品,或提取特定样品,或提取物种某种特定蛋白的方法。通过凝胶电泳按照分子量大小分离蛋白,再利用特异性抗体识别这些蛋白的技术。 2. 检测指标 样品是否表达某种蛋白;蛋白表达量有多少;蛋白有多大;蛋白时空变化;蛋白修饰鉴定等。
实验原理 蛋白质免疫印迹法,即Western Blot,基本原理涉及通过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)对蛋白质样品进行分离,随后将其转移至固相载体,如硝酸纤维素薄膜(NC膜)或PVDF膜。固相载体以非共价键方式吸附蛋白质,同时能够保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性的不变性。在该过程中,固相载体上的蛋白质或多肽被作为抗原...
一、Western Blot 原理 Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋...
Western Blot实验原理指在电场的作用下将电泳分离的多肽从凝胶转移至一种固相支持体,然后用这种多肽的特异抗体来检测。具体是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳, 对不同分子量的蛋白质进行分离,将分离到的蛋白质通过转移电泳方式转印至固相支持物,用抗靶蛋白的非标记抗体(一抗)与转印膜进行反应,使其与膜...
western blot实验原理 Western blot是一种常用的蛋白质分析技术,通过将待检测样品中的蛋白质分离并转移到膜上,然后使用特异性的抗体探针进行特定蛋白质的检测。 Western blot实验主要包括以下步骤: 1.样品制备:待检测样品通常经过细胞裂解或组织研磨,提取蛋白质。蛋白质溶液经过蛋白浓度测定后,可进行下一步实验。 2. ...