Western blot是显示蛋白丰度相对变化的半定量方法,通过分析信号强度,可以确定样本中目标蛋白的表达量相对于其它样本(如对照组、模型组)是增加还是减少。将目标蛋白条带发出的信号使用软件进行分析,计算出目标蛋白的相对定量值,即为WB定量。 对WB条带进行定量方法之一是灰度分析,灰度是计算机图像分析仪根据图像颜色深浅分...
一、WB实验的基本原理：蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除 ELISA 法外，也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法。与Southern或Northern杂交方法...
一、实验原理 蛋白免疫印迹（ Western Blot，WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。WB 是进行蛋白质分析最流行和成熟的技术之一。二、实验步骤 Western blot实验步骤可以分为蛋白样品的准备（包括蛋白质的提取和定量）...
①去除培养液，并将培养瓶倒扣在吸水纸上，确保吸水纸充分吸取残余培养液（或者将瓶直立放置片刻，使残余培养液流至瓶底，然后用移液器吸取）。②向每个培养瓶中加入3 ml 4℃预冷的PBS（0.01 M pH 7.2～7.3）。轻轻摇晃培养瓶进行1分钟的细胞洗涤，然后弃去洗液。重复上述步骤两次，总共进行三次洗涤以去除...
一、实验简介 1. 蛋白质免疫印迹(Western Blot)是利用聚丙烯酰胺凝胶电泳,检测特定样品,或提取特定样品,或提取物种某种特定蛋白的方法。通过凝胶电泳按照分子量大小分离蛋白,再利用特异性抗体识别这些蛋白的技术。 2. 检测指标 样品是否表达某种蛋白;蛋白表达量有多少;蛋白有多大;蛋白时空变化;蛋白修饰鉴定等。
实验步骤 1.准备样品，进行SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳后不要染色，直接进行转膜。2.转膜：转一张膜需准备 6 张 7.0～8.3 cm 的滤纸和 1 张 7.3～8.6 cm 的硝酸纤维素膜。将切好的硝酸纤维素膜置于转膜液中浸 20 min才可使用。在加有转移液的搪瓷盘里放入转膜用的夹子、两块海绵垫、一支...
一张PVDF膜，转膜槽，转移电泳仪，摇床，计时器，磁力搅拌器，转子，Western blot 盒，一块SDS-PAGE胶，脱脂奶粉实验步骤 (一) 配胶 将玻璃板洗净，最后用ddH2O冲洗，将与胶接触的一面向下倾斜置于干净的纸巾晾干。分离胶及浓缩胶均可事先配好（除AP及TEMED外），过滤后作为储存液避光存放于4℃，可至少存放1...
二、Western Blot 操作步骤 三、Western Blot的应用 1.检测材料或药物对某个信号通路上蛋白靶点的影响 肝癌是最常见的原发性癌症之一,仍是全球第六大癌症相关死亡原因。多靶点药物,如索拉非尼(SOR),是肝癌治疗的主要抑制剂;然而较差的水溶性、缺乏选择性和明显的耐药性,使其应用受到限制。上海理工大学李钰皓副教授...
western blot 实验原理western blot实验原理 Western blot是一种常用的蛋白质分析技术,通过将待检测样品中的蛋白质分离并转移到膜上,然后使用特异性的抗体探针进行特定蛋白质的检测。 Western blot实验主要包括以下步骤: 1.样品制备:待检测样品通常经过细胞裂解或组织研磨,提取蛋白质。蛋白质溶液经过蛋白浓度测定后,可...