以下实验步骤为个人所写,还做了个流程图,版权保留,转载需授权。 wb流程图mubu.com/doc/uTu3n77iUm 提蛋白 (不同细胞类型的蛋白或细胞不同部位的蛋白提取方法或有不同,需要提前查找资料) 我用的是凯基生物公司的全蛋白提取试剂盒 一般是取100 mg 标本 + 1 ml lysis buffer + 10 ul 磷酸酶抑制剂 + ...
蛋白质印迹/Western blotting实验操作步骤 一、总蛋白的提取 单层贴壁细胞总蛋白的提取： 1)吸除培养液 2)每皿细胞加 4℃预冷的 PBS。平放轻轻摇动 1min 洗涤细胞，然后弃去洗液。重复上操作两次，共洗细胞三次以洗去培养液。将PBS弃净后把培养瓶置于冰上。（PBS会降低细胞裂解液的效价和总蛋白的浓度）3)加...
超详细的保姆级western blotting 实验步骤 医学SCI主要提供SCI论文翻译润色、课题/实验设计、分子生物学、细胞学、病理学、免疫学、动物学等不同水平的实验操作。 图片来源于“百度图片” 1. 组织总蛋白的提取 1) 大鼠/小鼠断头处死,冰浴上取出组织并称重,按照 ...
WB,(Western blotting),中文名蛋白质印迹,又称免疫印迹(immunoblotting),用于检测特异性目的基因表达的蛋白成分。 比如说你要用大肠或者酵母表达某种目的蛋白,把基因克隆到宿主后,要检测的目的蛋白的表达就可以用western blot 总体来说有5个步骤,蛋白电泳,转膜,封闭,加抗体,以及检测。
一、Western Blotting 1.实验原理: Western Blotting(Western印迹)是用于检测特定蛋白在样品中的存在及其表达量的技术。其基本原理是先用SDS-PAGE电泳分离蛋白,然后将蛋白转移到膜上(如:聚偏氟乙烯膜),再使用特异性的抗体来检测目标蛋白。 2.实验步骤:
蛋白样品制备是Western Blotting的第一步,更是决定WB成败的关键步骤,总体原则和注意事项: 1.尽可能提取完全或降低样本复杂度只集中于提取目的蛋白(通过采用不同提取方法或选择不同的试剂盒产品); 2.保持蛋白处于溶解状态(通过裂解液的pH、盐浓度、表面活性剂、还原剂等的选择); 3.提取过程防止蛋白降解、聚集、沉淀...
Western blotting 实验步骤 第一步：蛋白质的提取 取冻存或新鲜组织黄豆大小200μl 细胞裂解液（用时加DTT 1：100，PMAF 1：100）用玻璃匀浆器捣碎，匀浆---200μl 涮管（注意：组织一定要碎到几乎所有的细胞都破裂）转移至冻存管中几乎所有的细胞都破裂）转移至冻存管中 液氮反复冻溶裂解细胞：液氮冷冻-...
关键词:Westernblot 一.实验步骤 1. 组织块称重 2. 利用液氮、研钵粉碎组织块 3. 加入RIPA缓冲液(每克组织3 ml RIPA),PMSF(每克组织30μl,10 mg/ml PMSF),利用Polytron进一步匀浆(15,000转/分*1分钟)维持4℃ 4. 加入PMSF(每克组织30μl,10 mg/ml PMSF),冰上孵育30分钟 ...