以下实验步骤为个人所写,还做了个流程图,版权保留,转载需授权。 wb流程图mubu.com/doc/uTu3n77iUm 提蛋白 (不同细胞类型的蛋白或细胞不同部位的蛋白提取方法或有不同,需要提前查找资料) 我用的是凯基生物公司的全蛋白提取试剂盒 一般是取100 mg 标本 + 1 ml lysis buffer + 10 ul 磷酸酶抑制剂 + ...
超详细的保姆级western blotting 实验步骤 医学SCI主要提供SCI论文翻译润色、课题/实验设计、分子生物学、细胞学、病理学、免疫学、动物学等不同水平的实验操作。 图片来源于“百度图片” 1. 组织总蛋白的提取 1) 大鼠/小鼠断头处死,冰浴上取出组织并称重,按照 ...
(3)按1ml裂解液加10 μl PMSF(苯甲基磺酰氟)(100mM),摇匀置于冰上,PMSF要摇匀至无结晶时才可与裂解液混合。 (4)每瓶细胞加400 μl含PMSF的裂解液,于冰上裂解30min,为使细胞充分裂解培养瓶要反复摇动。 (5)裂解完后,用干净的刮棒将细胞刮于培养瓶的一侧(动作迅速),然后用移液枪将细胞碎片和裂解液移...
蛋白质印迹/Western blotting实验操作步骤 一、总蛋白的提取 单层贴壁细胞总蛋白的提取： 1)吸除培养液 2)每皿细胞加 4℃预冷的 PBS。平放轻轻摇动 1min 洗涤细胞，然后弃去洗液。重复上操作两次，共洗细胞三次以洗去培养液。将PBS弃净后把培养瓶置于冰上。（PBS会降低细胞裂解液的效价和总蛋白的浓度）3)加...
Western blotting 实验步骤 第一步：蛋白质的提取 取冻存或新鲜组织黄豆大小200μl 细胞裂解液（用时加DTT 1：100，PMAF 1：100）用玻璃匀浆器捣碎，匀浆---200μl 涮管（注意：组织一定要碎到几乎所有的细胞都破裂）转移至冻存管中几乎所有的细胞都破裂）转移至冻存管中 液氮反复冻溶裂解细胞：液氮冷冻-...
Western Blotting Protocol 蛋白印迹实验步骤 蛋白印迹实验 (WB) 广泛用于分析细胞或组织提取物中的特异性蛋白表达。我们理解蛋白印迹实验非常耗时,且对于您的研究进展至关重要。为此,我们在提供优化的实验步骤时,还提供参考信息和技术支持,以便让您在蛋白印迹实验中取得成功。 Show More ...
一、Western Blotting 1.实验原理: Western Blotting(Western印迹)是用于检测特定蛋白在样品中的存在及其表达量的技术。其基本原理是先用SDS-PAGE电泳分离蛋白,然后将蛋白转移到膜上(如:聚偏氟乙烯膜),再使用特异性的抗体来检测目标蛋白。 2.实验步骤:
蛋白样品制备是Western Blotting的第一步,更是决定WB成败的关键步骤,总体原则和注意事项: 1.尽可能提取完全或降低样本复杂度只集中于提取目的蛋白(通过采用不同提取方法或选择不同的试剂盒产品); 2.保持蛋白处于溶解状态(通过裂解液的pH、盐浓度、表面活性剂、还原剂等的选择); 3.提取过程防止蛋白降解、聚集、沉淀...