westernblot原理:蛋白质的电泳分离。是重要的生物化学分离纯化技术之一,电泳是指带电粒子在电场作用下,向着与其电荷相反的电极移动的现象。 westernblot步骤: (一)蛋白质样品获得:细菌诱导表达后,可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞,真核细胞加匀浆缓冲液,机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃,13,000g离心15min。...
Western blot 操作步骤 实验原理: Western blot,也称 Western blotting、蛋白印迹,是用抗体检测蛋白的重要方法之一。 Western blot 采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳〔SDS-PAGE〕,被检测物是蛋白质,“探针〞是抗 体,“显色〞用标记的二抗。经过 PAGE 别离的蛋白质样品,转移到固相载体〔例如 PVDF 膜〕上, 固相载体以非...
(4)加入一抗(按合适稀释比例用0.01M PBS稀释,液体必须覆盖膜的全部),4℃ 放 置12hr以上.阴性对照,以1%BSA取代一抗,其余步骤与实验组相同. (5)弃一抗和1%BSA,用0.01M PBS分别洗膜,5min×4次. (6)加入辣根过氧化物酶偶联的二抗(按合适稀释比例用0.01M PBS稀释),平稳摇动, 室温2hr. (7)弃二抗,用0.0...
免疫印迹（immunoblotting）又称蛋白质印迹（Western blotting），是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上，发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免...