2.1.9 测量印记的灰度值,使用矩形/椭圆/不规则选框选择需要测量的印记,然后使用快捷键(ctrl + M)或者菜单命令“analyze- measure”; (图16 选中需要测量的印记条带) (图17 测量结果展示,红框标记部分IntDen即为本次测量的光密度数值) 2.1.10 数据导出:file- save as; (图18 数据导出设置) (图19 导出数据...
A5:有以下几种可能的原因:(1)样品中存在没有溶解的物质,可在加样前将样品离心或者优化蛋白质的提取方法;(2)蛋白样品发生降解,成分发生变化,导致出现不同的条带,制备样品时注意在冰上操作并加入蛋白酶抑制剂;(3)电泳液反复使用多次,建议电泳液或转膜液现配现用,勿重复使用;(4)分离胶浓度过大,可根据蛋白分子...
Western Blot的第一步为蛋白提取,提取方法根据检测目标的类型可分为总蛋白提取、核蛋白提取、膜蛋白提取,对于大多数应用进行总蛋白提取即可。 总蛋白提取所需的试剂为:裂解液、蛋白酶抑制剂。 ▲裂解液 裂解液的成分主要有Triton X-100、NP-40、SDS等,不同裂解强度和实验应用范围的裂解液成分有所差别,裂解液的原...
蛋白免疫印迹即Werstern blot,是将印迹技术与抗原-抗体反应的特异性相结合的检测技术,用于分离和检测生物标本中的某一特定蛋白。其基本原理实混合蛋白质样本通过凝胶电泳分离后,通过特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质(NC膜或PVDF 膜)上,将针对待测蛋白的特...
Western Blot实验的最后一步,是显影。拿到高特异性、低背景的显色图像,将为实验结论提供强有力的佐证。显色的原理是实验中的二抗被HRP(辣根过氧化物酶)标记,可采用增强化学发光法(ECL)。ECL灵敏度高、重复性好,是目前主流的WB显色方法。 图一、全自动化学...
图 1. Western blot 的流程图[1]。1 蛋白样本制备 1.1 总蛋白提取 (1) 准备溶液 室温融解蛋白...
图1. Western blot 操作流程简介 理想很丰满,现实很骨感,像在某宝买东西写差评:跟想象中不一样。顺便再晒几张“辣眼”买家秀以证现实的残酷。我的实验结果中出现了各种稀奇古怪的玩意儿??? ■ 古怪一:高背景 萌Cece 分析: 1、洗涤不充分,膜没有洗干净。
见本人另一文章石蜡切片和冰冻切片之高质量HE染色、免疫组化、免疫荧光染色),Western blot常常被我们...
1、Western BlotWestern Blot实验原理实验原理 Western Blot中文一般称为蛋白质印迹。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是把通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的蛋白质变为可见、可分析的灰色条带,通过分析条带的位置和条带着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况...
蛋白质免疫印迹法即Western Blot。 它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,基本原理是经过 PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体例如硝酸纤维素薄膜(NC膜)或PVDF膜上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。