1、Western blot实验技巧之蛋白样品制备、SDS-PAGE胶制备、跑电泳、转膜、孵育抗体、显影和ImageJ分析(来自一位可稳定重复WB结果的科研狗之四年经验总结) 2、“玄学”实验-Western blot的内参你选对了吗? 3、SDS-PAGE凝胶制备技巧,易翻车点及其解决方法汇总(五年经验结晶) 4、石蜡切片和冰冻切片之高质量HE染色、...
Western Blot的第一步为蛋白提取,提取方法根据检测目标的类型可分为总蛋白提取、核蛋白提取、膜蛋白提取,对于大多数应用进行总蛋白提取即可。 总蛋白提取所需的试剂为:裂解液、蛋白酶抑制剂。 ▲裂解液 裂解液的成分主要有Triton X-100、NP-40、SDS等,不同裂解强度和实验应用范围的裂解液成分有所差别,裂解液的原...
1.准备样品，进行SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳后不要染色，直接进行转膜。2.转膜：转一张膜需准备 6 张 7.0～8.3 cm 的滤纸和 1 张 7.3～8.6 cm 的硝酸纤维素膜。将切好的硝酸纤维素膜置于转膜液中浸 20 min才可使用。在加有转移液的搪瓷盘里放入转膜用的夹子、两块海绵垫、一支玻棒、滤纸和...
蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)是将蛋白质经电泳分离后转移到膜上,然后利用抗体进行检测的技术。完整的WB流程,如下图所示,包含样本制备、SDS-PAGE、转膜、抗体结合、蛋白检测等5个大步骤。 样品制备 1、蛋白提取 1)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM。
1、SDS-PAGE凝胶的厚度通常为1.0mm和1.5mm，WB实验使用1.0mm厚度的凝胶转印效果较好。2、实验前可通过向组装好的玻璃板中加入双蒸水检查是否漏水，如组装无误但发生了漏水现象，可能是玻璃板或胶条密封性出现了问题，也有可能是架子松动无法卡紧，需及时更换器材，以免实验中出现漏胶现象。三、分离胶和浓缩胶的...
western blot是通过聚丙烯酰胺电泳(SDS PAGE)将蛋白质按照分子量大小分离,再转移到膜上,最后通过一抗、二抗以及显色液对蛋白进行特异性标记的方法。 今天给大家分享一下实验过程中的小细节～ ♥️样品处理细胞样品加入裂解液 - poppy(读博版)于20240529发布在
SDS-PAGE凝胶电泳是一种可以根据蛋白质的分子量分离样本中蛋白的技术,在电荷的影响下分离大分子称为电泳(electrophoresis),在SDS-PAGE中使蛋白质呈线性化的试剂是SDS,使用的凝胶是聚丙烯酰胺(polyacrylamide),因此得名SDS-PAGE。 2.sds-page凝胶电泳原理:
分离胶浓度过大，可根据蛋白分子量大小选择合适的分离胶浓度，分子量越大对应的分离胶浓度越低，具体可参考下表。本期主要介绍了WB的实验流程和注意事项，下期将介绍Northern blot和Southern blot的相关内容，感兴趣的小伙伴可以留意一下哦~汉恒专营工具病毒十余载，如有SDS-PAGE和WB相关技术问题，欢迎随时咨询！
免疫印迹,又被称为蛋白质印迹(Western blot,WB),是一种复合性的免疫学检测技术。该方法通过利用SDS-PAGE技术,在生物样本中将蛋白质分子根据其分子量在凝胶上进行分离,随后通过电转移的方式将这些蛋白质转移到固相膜上。固相膜上的蛋白质充当抗原,与相应的抗体发生免疫反应,接着与酶标记的第二抗体发生反应。最终,通...
Western Blot是我们实验室中最常见的实验,也常常是科研小白要经过的第一关,看到小白们时而抓狂,时而蓝瘦,小编们经过不断的实践和阅读大量的老司机秘籍,将与大家分享交流WB那些事儿。 首先我们要了解WB的原理:Western blot是将蛋白样品经SDS-PAGE(SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳...