1、Western blot实验技巧之蛋白样品制备、SDS-PAGE胶制备、跑电泳、转膜、孵育抗体、显影和ImageJ分析(来自一位可稳定重复WB结果的科研狗之四年经验总结) 2、“玄学”实验-Western blot的内参你选对了吗? 3、SDS-PAGE凝胶制备技巧,易翻车点及其解决方法汇总(五年经验结晶) 4、石蜡切片和冰冻切片之高质量HE染色、...
蛋白质免疫印迹法,即Western Blot,是一种复合性的免疫学检测技术,基本原理是通过SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)对蛋白质样品进行分离,随后将其转移至固相载体,如硝酸纤维素薄膜(NC膜)或PVDF膜。固相载体以非共价键方式吸附蛋白质,同时能够保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性的不变性。在该过程中,固相载体上的蛋白质...
这一技术起源于Southern的DNA印迹研究，随后又发展出了Northern blot（RNA印迹）和western blot（蛋白印迹）。Western blot技术，则以其独特的抗体识别机制，广泛应用于凝胶电泳分离的蛋白质的检测中。而在此之前，我们需先了解SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳），通常简称为聚丙烯酰氨凝胶电泳。那么，SDS和...
蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)是将蛋白质经电泳分离后转移到膜上,然后利用抗体进行检测的技术。完整的WB流程,如下图所示,包含样本制备、SDS-PAGE、转膜、抗体结合、蛋白检测等5个大步骤。 样品制备 1、蛋白提取 1)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM。
1、SDS-PAGE凝胶的厚度通常为1.0mm和1.5mm，WB实验使用1.0mm厚度的凝胶转印效果较好。2、实验前可通过向组装好的玻璃板中加入双蒸水检查是否漏水，如组装无误但发生了漏水现象，可能是玻璃板或胶条密封性出现了问题，也有可能是架子松动无法卡紧，需及时更换器材，以免实验中出现漏胶现象。三、分离胶和浓缩胶的...
分离胶浓度过大，可根据蛋白分子量大小选择合适的分离胶浓度，分子量越大对应的分离胶浓度越低，具体可参考下表。本期主要介绍了WB的实验流程和注意事项，下期将介绍Northern blot和Southern blot的相关内容，感兴趣的小伙伴可以留意一下哦~汉恒专营工具病毒十余载，如有SDS-PAGE和WB相关技术问题，欢迎随时咨询！
Western Blot是我们实验室中最常见的实验,也常常是科研小白要经过的第一关,看到小白们时而抓狂,时而蓝瘦,小编们经过不断的实践和阅读大量的老司机秘籍,将与大家分享交流WB那些事儿。 首先我们要了解WB的原理:Western blot是将蛋白样品经SDS-PAGE(SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳...
PAGE分为变性聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)和非变性聚丙烯凝胶电泳(native-PAGE),两种电泳系统的主要差别是SDS-PAGE添加了SDS和疏基乙醇变性剂,并在加热条件下将聚合蛋白质充分变性为亚基进行分离,而native-PAGE不含变性剂,多在低温条件下对天然构象的蛋白质(寡聚或单体)进行分离。SDS-PAGE电泳可以将蛋白质变性为亚基,按...
免疫印迹,又被称为蛋白质印迹(Western blot,WB),是一种复合性的免疫学检测技术。该方法通过利用SDS-PAGE技术,在生物样本中将蛋白质分子根据其分子量在凝胶上进行分离,随后通过电转移的方式将这些蛋白质转移到固相膜上。固相膜上的蛋白质充当抗原,与相应的抗体发生免疫反应,接着与酶标记的第二抗体发生反应。最终,通...
Western Blot（WB），一般称为蛋白质印迹。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。WB实验流程如图1所示，首先在SDS胶上将蛋白质分离...