1、Western blot实验技巧之蛋白样品制备、SDS-PAGE胶制备、跑电泳、转膜、孵育抗体、显影和ImageJ分析(来自一位可稳定重复WB结果的科研狗之四年经验总结) 2、“玄学”实验-Western blot的内参你选对了吗? 3、SDS-PAGE凝胶制备技巧,易翻车点及其解决方法汇总(五年经验结晶) 4、石蜡切片和冰冻切片之高质量HE染色、...
图2 湿法转印堆积层组装示意图 (1)转印缓冲液:Tris 5.8g、甘氨酸2.9g、10%(v/v)甲醇、SDS 0.37g、甲醇200ml使用蒸馏水定容至1L,pH 8.3,4℃保存。 (2)SDS-PAGE电泳结束后取出凝胶,只需要分离胶部分,浸泡在转印缓冲液中10-30 min。 (3)将滤纸浸泡在转印缓冲液中至少30 s。 (4)转印膜在甲醇中浸泡30s,...
1、SDS-PAGE凝胶的厚度通常为1.0mm和1.5mm，WB实验使用1.0mm厚度的凝胶转印效果较好。2、实验前可通过向组装好的玻璃板中加入双蒸水检查是否漏水，如组装无误但发生了漏水现象，可能是玻璃板或胶条密封性出现了问题，也有可能是架子松动无法卡紧，需及时更换器材，以免实验中出现漏胶现象。三、分离胶和浓缩胶的...
（1）转印缓冲液：Tris 5.8g、甘氨酸2.9g、10%（v/v）甲醇、SDS 0.37g、甲醇200ml使用蒸馏水定容至1L，pH 8.3，4℃保存。（2）SDS-PAGE电泳结束后取出凝胶，只需要分离胶部分，浸泡在转印缓冲液中10-30 min。（3）将滤纸浸泡在转印缓冲液中至少30 s。（4）转印膜在甲醇中浸泡30s，完全浸湿，接着放入...
Western Blot（WB），一般称为蛋白质印迹。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。WB实验流程如图1所示，首先在SDS胶上将蛋白质分离...
SDS-PAGE电泳在上期已详细介绍,本期将详细介绍其余实验步骤及注意事项。 图1 WB实验流程示意图 一、转膜 这一步是将蛋白质转移至固相载体上,常用固相材料有NC膜、PVDF膜等。常用湿法或半干法转模。这一实验步骤中要戴一次性PE手套,防止手上的蛋白污染膜。
图1 SDS-PAGE实验流程示意图 实验步骤 一、实验所需溶液 1、30%丙烯酰胺:丙烯酰胺29.2g,亚甲基双丙稀酰胺0.8g,加入双蒸水定容至100mL, pH值不能超过7.0,容器外包锡纸,4℃冰箱保存。 2、分离胶缓冲液:1.5mol/L Tris-HCI,pH8.8:9.09g Tirs碱,溶于30mL双蒸水中,加入浓盐酸调节pH值至8.8,定容至50mL。
一、实验原理 Western blot（也称为蛋白质免疫印迹）是一种常用于研究中分离和鉴定蛋白质的技术。它利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 来分离指定样品中包含的各种蛋白质，然后将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或 PVDF 膜上，接下来将膜与对感目标蛋白质的特异抗体一起孵育。在洗膜过程中，未结合的抗体被...
western blot是通过聚丙烯酰胺电泳(SDS PAGE)将蛋白质按照分子量大小分离,再转移到膜上,最后通过一抗、二抗以及显色液对蛋白进行特异性标记的方法。 今天给大家分享一下实验过程中的小细节～ ♥️样品处理细胞样品加入裂解液 - poppy(读博版)于20240529发布在
分子生物学方法学介绍|Western Blot实验详解(3) WB大致流程为:SDS-PAGE电泳→转膜→一抗孵育→二抗孵育→显色。SDS-PAGE电泳在上期已详细介绍,本期将详细介绍其余实验步骤及注意事项。 图1 WB实验流程示意图 一、转膜 这一步是将蛋白质转移至固相载体上,常用固相材料有NC膜、PVDF膜等。常用湿法或半干法转模。