Western Blot是运用免疫学的方法能对蛋白质进行定性和定量分析的一项重要技术,所以运用Western Blot的技术不仅对临床应用有重要意义,而且同时也能为学术研究提供更有效的信息。 二、关键词 免疫印迹,SDS-PAGE,蛋白定量 三、实验样品信息,试剂、耗材或仪器 材料 1.5mlEP管(康宁生命科学有限公司);15mlEP管(康宁生命科学...
(1)当我们把混合样品通过SDS-PAGE电泳分离之后,理论上可以通过所得条带的分子量来鉴定目的蛋白是否存在,但是这种鉴定受到很多因素的干扰,非常不准确。因此我们需要进一步使用Western blot (蛋白质印迹法)来鉴定血清中的IgG含量的多少。 凝胶上的蛋白质条带 (2)Western blot属于印迹法,是样品经过电泳分离后,转印至膜...
2、封闭 :将转移后的硝酸纤维素膜放在TBS缓冲液中,漂洗5分钟,然后膜的正面朝上,放在装有封闭液的平皿中,室温轻摇30分钟。 3、一抗结合将硝酸纤维素膜放入杂交袋中,封好三面,按0.1ml/cm2加入封闭液和小鼠抗人p53蛋白的单克隆抗体(1:400稀释),驱赶气泡,封严杂交袋,膜的正面朝上,放在摇床上,4°C轻摇过夜。
Tip:通过BCA分析法,分析牛奶中蛋白质的含量,在通过SDS-PAGE和Coomassie Blue染色观察蛋白质电脉冲结果的基础上,进行Western Blot,使membrane transfer,通过实验熟知利用抗原-抗体反应对特定蛋白质进行定量分析和检测的方法 实验方法 蛋白质定量分析法-BCA法 制作Sample&Stardard 牛奶中约含有5%的蛋白质,1ml牛奶中约含有...
免疫荧光、SDS-PAGE、Western-blot实验技术 免疫荧光技术SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）Westernblotting实验技术 一、免疫荧光技术 基本原理：免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检测组织或细胞内的相应抗原（或抗体）。在...
前一个只是把蛋白进行电泳分析，主要用于蛋白纯度分析及分子量分析，主要用于定性；后者则是在前者的基础上又经过了转膜及杂交等步骤，用于分析特定蛋白的表达多少的。
SDS-PAGE and Western blot SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳SodiumDodecylSulfatePolyacrylamideGelElectrophoresis(SDS-PAGE)SDS(SodiumDodecylSulfate,十二烷基磺酸钠)磺酸钠•是阴离子去污剂；是阴离子去污剂；•破坏蛋白质分子的二硫键及非共价键，破坏蛋白质分子的二硫键及非共价键，改变其构象为线状分子；...
western blot是通过聚丙烯酰胺电泳(SDS PAGE)将蛋白质按照分子量大小分离,再转移到膜上,最后通过一抗、二抗以及显色液对蛋白进行特异性标记的方法。 今天给大家分享一下实验过程中的小细节～ ♥️样品处理细胞样品加入裂解液 - poppy(读博版)于20240529发布在
蛋白质SDS-PAGE电泳与Western Blot 一、蛋白质SDS-PAGE电泳 1、安装垂直板电泳装置 用洗洁精、清水和无水乙醇清洗两块玻璃板,晾干后安装。 2、制备SDS-聚丙烯酰胺凝胶 (1)配制9%分离胶(15ml):双蒸水 6.55ml,1.5M Tris-HCl(pH8.8)3.75ml,30%丙烯酰胺储存液...
SDS-PAGE是一种基于不同分子量分离蛋白的实验方法。Western Blot是一种从蛋白混合物中半定量分析某种特定...