前一个只是把蛋白进行电泳分析,主要用于蛋白纯度分析及分子量分析,主要用于定性;后者则是在前者的基础上又经过了转膜及杂交等步骤,用于分析特定蛋白的表达多少的。
sds page 胶是用来分离蛋白的,而western blot是用sds page 胶分离蛋白后再转膜,然后用一抗二抗孵育,最后显色,出现蛋白条带的一个检测蛋白的方法。00分享举报
表达蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 一、原理 细菌体中含有大量蛋白质,具有不同的电荷和分子量。强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用,通过加热使蛋白质解离,大量的SDS结合蛋白质,使其带相同密度的负电荷,在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)上,不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。采用考马斯亮兰快速染色,可及时观察电泳...
主要用于蛋白纯度分析及分子量分析,主要用于定性;后者则是在前者的基础上又经过了转膜及杂交等步骤,用于分析特定蛋白的表达多少的。
免疫荧光、SDS-PAGE、Western-blot实验技术 免疫荧光技术SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)Westernblotting实验技术 一、免疫荧光技术 基本原理:免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素,制成荧光抗体,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检测组织或细胞内的相应抗原(或抗体)。在...
western blot 是检测蛋白是否表达的实验。SDS是十二烷基硫酸钠。page是聚丙烯酰胺啊
二、蛋白质印迹免疫分析(Western Blot) 1、蛋白质转膜 (1)取下胶板,小心去除一侧玻璃板,切去浓缩胶和分离胶无样品的部分,将凝胶分成两半,含分子量标准的部分用考马斯亮蓝染色。 (2)精确测量剩余胶的大小,按该尺寸剪取一张硝酸纤维素膜和两张滤纸(BioRad专用),在转移缓冲液中将膜和滤纸浸泡15分钟。
蛋白电泳 SDS-PAGE原理 SDS是一种阴离子表面活性剂,能打断蛋白质的氢键和疏水键,并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物,使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷,掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此,各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移率,不再受原有电荷和分子形状的影响,而只是棒长的函数。
Western Blot检测时,相对广泛采用的是SDS-PAGE。对于SDS-PAGE,是在电泳体系中加入变性剂SDS和还原剂DTT或者巯基乙醇等。蛋白质分子的多聚体或者高级结构会被打开,蛋白质氨基酸侧链和SDS结合形成蛋白-SDS复合物,所带的负电荷大大超过了蛋白质原有的电荷量,因此可以有效消除不同蛋白质分子间的电荷差异和空间结构差异。