GAPDH,Tubulin,Actin是WB实验中最常用的三种上样内参(loadingcontrol),表达水平受环境因素影响较小,在个体各个生长阶段的大多数或几乎全部组织中持续表达或变化很小,被称为管家基因,是WB实验中校正上样量、检测上样过程中存在实验误差,保证实验结果准确性必不可少。 如何选择合适的内参? A)尽量避免内参与靶标蛋白的...
随着荧光染料技术的进步,定量范围、灵敏度和稳定性都较ECL检测显著提高,Western blot检测也因此进入了定量分析的行列,而这对样品上样量一致性的控制提出了更高的要求。LI-COR公司是定量Western blot领域的领头羊,它的Odyssey双色红外激光成像系统具有*高的市场占有率,核心的近红外荧光染料具有定量准确、线性范围广、背...
在Western Blot实验中，选择合适的内参蛋白对于确保实验结果的准确性至关重要。今天小曼带小伙伴们探讨三种常用的内参蛋白——GAPDH、Tubulin和Actin，并指导您如何根据实验条件选择最合适的内参。GAPDH GAPDH是在细胞代谢糖酵解中起关键作用的酶，分子量36kDa，通常表达量较高，在同种细胞或组织中的表达量一般是恒定的...
免疫印迹(Western blot, WB)是分子生物学中检测复杂生物提取物中特定蛋白质存在的最常用方法之一。WB必须控制上样量以确保目标蛋白变化具有可比性,通常选择在所有组织中普遍分布的具有相对恒定量的蛋白质作为内参(Loading control)。 内参与其上样量应该如何确定?哪种内参最靠谱? 常用内参抗体分子量及其定位情况如下: ...
阳性对照(Positive Control)是已知或公认有目的蛋白表达的样本。当对一个靶标并无检测经验时,在实验初期,强烈建议增加阳性对照帮助排查一系列问题,例如,待测样本中该靶标的表达量、操作步骤、抗体表现等。 而内参蛋白如β-actin, GAPDH等,一般在样本中高表...
WesternBlot内参的选择,老司机都不知道这些窍门内参即是内部参照(InternalControl),对于哺乳动物细胞来说一般是指 由管家基因编码表达的蛋白(HousekeepingProteins),它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测蛋白的表达水平变 化时常用它来做参照物。一、为什么要使用内参呢?Westernblot除了能证明某样品含有某种蛋白之外,...
内参即内部参照(Internal Control),类似于荧光定量实验的内参基因,对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由看家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins),它们在不同组织和细胞中的表达相对恒定,常用它作为检测目的蛋白表达水平变化时来做参照物。 1.内参抗体的功能: ...
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在Western Blot实验中，β-Actin抗体常常作为内参指数起着关键的作用。简单来说，它就像一个实验中的参照物，帮助评估目的蛋白的检测结果。以下是它在实验中的几个重要作用：首先，β-Actin作为细胞内的“看家基因”，其表达应该是相对稳定的，因此，如果在检测过程中目的蛋白和β-Actin都未检测到，可能...
β-actin抗体是Western Blot很好的内参指数，意味着它在蛋白质研究中有着重要作用。详细解释如下：一、β-actin抗体的作用 在Western Blot实验中，β-actin抗体常被用作内参指数。内参是用于标准化实验过程，确保实验结果的可靠性与准确性的重要参照物。β-actin作为一种在大多数细胞中稳定表达的蛋白质，...