这种现象可归因于β-Actin的丰度,β-Actin丰度远远高于细胞中的大多数其他蛋白质。结果导致β-Actin经常超载,特别是在检测低丰度蛋白质时无法区分蛋白质上样量的差异。为了确认β-Actin的适用范围,在低于4μg的范围内连续稀释样品进行分析(方形折线为理论含量,圆形折线为实际检测情况): 结果显示在在0.7-1.9μg范围内...
Western blot实验流程示意图(图片来源于网络) Western blot的结果判读上,一般通过肉眼比较条带的粗细即能比较出蛋白含量的高低,撰写文章时也仅需要展示如上的条带图即可,换言之,属于定性或半定量检测方法。但其实也存在定量Western blot...
如下图所示,Saos-2细胞高表达RUNX2,适宜作为阳性对照样本,而LNCaP细胞不表达该靶标。 图2:使用 RUNX2 (D1L7F) Rabbit mAb #12556和 β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457, 对 Saos-2 和 LNCaP 细胞的提取物进行蛋白质印迹分析。 b. 翻译后修饰...
(八) 显影曝光1、试剂盒A液+B液现配现用(A:B=1:1),避光保存;2、夹起膜放入玻璃皿中,吸显影液滴在膜上,确保显影液浸润到了膜所有地方;3、image Lab曝光步骤:膜放置皿中(小口径玻璃皿中)—打开仪器(image lab),膜放入机器—选择印迹—colorimetic—自动曝光—拍白光圈4、曝光拍照(CHEMI)—选择“放置凝胶...
解析 描述有问题.抗体检测的是抗原,所以你检测的是β-Actin做western很重要的一点就是要有一个参照,比如你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达,甚至它的变化(比如对某个细胞因子的反应),这时β-Actin起到几个作用:1、如果目...结果一 题目 β-Actin抗体是Western Blot很好的内参指数,是啥意思?β-Actin在整个Western ...
选择内参抗体时,应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KDa以上。比如检测目的蛋白分子量为45KDa,此时不适宜选择β-actin(42KDa)作为内参,可以考虑选择GAPDH(36KDa)作为内参。 二、种属 不同种属的样本内参蛋白不同。
β-Actin与GAPDH内参真的那么靠谱吗? 哪种内参最靠谱? 免疫印迹(Western blot, WB)是分子生物学中检测复杂生物提取物中特定蛋白质存在的最常用方法之一。WB必须控制上样量以确保目标蛋白变化具有可比性,通常选择在所有组织中普遍分布的具有相对恒定量的蛋白质作为内参(Loading control)。
解答一 举报 描述有问题.抗体检测的是抗原,所以你检测的是β-Actin做western很重要的一点就是要有一个参照,比如你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达,甚至它的变化(比如对某个细胞因子的反应),这时β-Actin起到几个作用:1、如果目... 解析看不懂?免费查看同类题视频解析查看解答 更多答案(1) ...
Western blot,中文为蛋白质免疫印迹试验,简单来说是抗原抗体特异性结合。 电泳分离后的蛋白转移到固相载体PVDF膜上,以共价键的形式吸附蛋白质,并作为抗原结合特异性抗体。二抗作为显色标记,经过底物显色反应组织和细胞中蛋白的表达情况。 蛋白提取 1. 组织蛋白提取相对于细胞而言,组织蛋白的提取对技术和外界环境要求会...
β-actin抗体是Western Blot很好的内参指数，意味着它在蛋白质研究中有着重要作用。详细解释如下：一、β-actin抗体的作用 在Western Blot实验中，β-actin抗体常被用作内参指数。内参是用于标准化实验过程，确保实验结果的可靠性与准确性的重要参照物。β-actin作为一种在大多数细胞中稳定表达的蛋白质，...