1、总蛋白或者胞质蛋白内参(定位于细胞质)主要包括以下3类: β-actin(肌动蛋白):β-actin广泛存在于不同类型的细胞中,分子量约为42 kDa,主要位于细胞质中,是一种结构蛋白,参与细胞骨架的构建和细胞的运动等功能。 GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶):GAPDH参与细胞糖酵解途径中的反应,分子量约为36 kDa,位于细胞质...
这些不同的亚型组织分布是不一样的,在肌肉组织中beta-actin分布就很少,心肌主要是alpha-cardiac muscle actin。因此不同的组织本来就应该选择不同的内参,不能一概而论。 内容转引自: 三、怎样才能跑出完美的内参条带? 我们在western blot实验中可能会遇到内参条带不齐的情况,那么是什么原因造成的呢? 现在我就自...
在Western Blot实验中，选择合适的内参蛋白对于确保实验结果的准确性至关重要。今天小曼带小伙伴们探讨三种常用的内参蛋白——GAPDH、Tubulin和Actin，并指导您如何根据实验条件选择最合适的内参。GAPDH GAPDH是在细胞代谢糖酵解中起关键作用的酶，分子量36kDa，通常表达量较高，在同种细胞或组织中的表达量一般是恒定的...
Western Blot 实验方案整理。常用内参 β-actin,GAPDH,β-tubulin为三大常用内参。 β-actin,肌动蛋白,细胞骨架蛋白。在各组织和细胞中的表达相对恒定,它广泛分布于细胞质内,表达量非常丰富。 GAPDH,甘油醛-3-磷酸脱氢酶,该酶是糖酵解反应中的一个酶,几乎在所有组织细胞中都高水平表达,在同种细胞或组织中的表达...
β-Actin与GAPDH内参真的那么靠谱吗? 哪种内参最靠谱? 免疫印迹(Western blot, WB)是分子生物学中检测复杂生物提取物中特定蛋白质存在的最常用方法之一。WB必须控制上样量以确保目标蛋白变化具有可比性,通常选择在所有组织中普遍分布的具有相对恒定量的蛋白质作为内参(Loading control)。
β-Actin与GAPDH内参真的那么靠谱吗?哪种内参最靠谱? 免疫印迹(Western blot, WB)是分子生物学中检测复杂生物提取物中特定蛋白质存在的最常用方法之一。WB必须控制上样量以确保目标蛋白变化具有可比性,通常选择在所有组织中普遍分布的具有相对恒定量的蛋白质作为内参(Loa...
另一个是普通内参比如actin和GAPDH等,普通内参是作为体系的对照,保证上样量一致从而排除体系本身的影响。 Western blotting检测PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT表达 研究总蛋白有两种方法 ①相同的样品在不同的孔中上样两次(可在相同的胶上,也可在不同的胶上),其一压磷酸化蛋白,另一压该蛋白总的表达量(包括磷酸化和...
选择内参抗体时,应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KDa以上。比如检测目的蛋白分子量为45KDa,此时不适宜选择β-actin(42KDa)作为内参,可以考虑选择GAPDH(36KDa)作为内参。 二、种属 不同种属的样本内参蛋白不同。
可信。此外使用内参可以作为空白对照,检测蛋白转膜情况是否完全、整个WesternBlot显色或者发光体系是否正常。?二、如何选择 合适的内参呢?有些人提取蛋白会选择胞浆、胞核分开提取,不提取总蛋白。β-actin在胞浆中表达高效稳定,而总蛋白主要成分就是胞浆蛋
Western Blot实验中内参蛋白的选择是关键，常见的有GAPDH、Tubulin和Actin。GAPDH，作为糖酵解过程中的关键酶，分子量36kDa，表达稳定但可能在特殊条件下如缺氧、糖尿病时变化，不推荐这些情况下的内参。Actin，尤其是β-actin，作为细胞骨架蛋白，42kDa，广泛存在于真核细胞中，适合全细胞和细胞质样品标准...