内参是western blot法非常重要而必须的部分。它保证了目的蛋白表达量的相对多少。内参是指由细胞中管家基因编码的蛋白,其在各组织细胞中的表达相对稳定,因此在测定目的蛋白的相对水平时常用它做对照物。 一、内参介绍 哺乳动物细胞中常用的内参很多且分布广泛: 全细胞或细胞浆中---tubulin (微管蛋白), actin (肌动...
其次我们要明确待检测基因的亚细胞定位,跑细胞总蛋白的Western blot一般用β-actin和Tubulin等细胞内较稳定表达的蛋白作为内参没什么毛病,但是核蛋白的内参要考虑用Lamin A,Lamin B,histone H3等;膜蛋白的内参一般用N-Cadherin。 EphA1 activation promotes the homing of endothelial progenitor cells to hepatocellular ...
GAPDH GAPDH是在细胞代谢糖酵解中起关键作用的酶，分子量36kDa，通常表达量较高，在同种细胞或组织中的表达量一般是恒定的，且很少受外部诱导物的影响。然而，在某些特定条件下，比如缺氧和糖尿病等疾病存在时，其表达可能会发生变化，因此在这些情况下不推荐作为内参。Actin Actin（最常用β-actin）是构成细胞骨架...
在Western Blot实验中，β-Actin抗体常常作为内参指数起着关键的作用。简单来说，它就像一个实验中的参照物，帮助评估目的蛋白的检测结果。以下是它在实验中的几个重要作用：首先，β-Actin作为细胞内的“看家基因”，其表达应该是相对稳定的，因此，如果在检测过程中目的蛋白和β-Actin都未检测到，可能意...
通常带有荧光或酶标记，用于放大一抗的信号，从而使得检测结果更加明显。尽管Western Blot实验主要依赖间接标记法，但这种方法能够提供较高的灵敏度和特异性，使得目的蛋白的检测更加准确。通过选择合适的内参蛋白，如β-actin，可以有效提高实验结果的可信度，确保实验数据的真实性和可靠性。
心肌和骨骼肌样本可以用 alpha-Actin 做内参。Caspase-3 对 Actin 的清除会加速泛素/蛋白酶体依赖的肌肉蛋白酶解11。 细胞生长条件的改变以及与胞外基质组分的相互作用都可能会导致 Actin 蛋白合成的变化 。7. GAPDH（甘油醛－3－磷酸脱氢酶）, 在糖酵解过程中将 3-磷酸甘油醛进一步磷酸化。虽然在不同组织中的...
.研究模型是心肌,骨骼肌或者平滑肌(这些组织有特异的actin)2).肌肉组织(由于肌肉组织中β-actin分布很少,不易检测)3).细胞或肿瘤恶化时,B-actin 的表达水平异常4).细胞总蛋白的Western Blot的内参蛋白一般用B-actin5).某些特殊组织(脂肪细胞,肝脏)或者内脏,B-actin蛋白并不稳定#医学生#手册#WB#WB实验#细胞...
操作过程必须全程低温,尽可能冰上操作;裂解液中必须包含蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂,以防止内源性蛋白磷酸酶催化磷酸化蛋白的去磷酸化;为了准确评估磷酸化水平的变化,需要设置两个内参,一个是磷酸化蛋白对应的总蛋白,另一个是普通内参如actin或gapdh,作为体系的对照,确保上样量一致。
详细解释如下：一、β-actin抗体的作用 在Western Blot实验中，β-actin抗体常被用作内参指数。内参是用于标准化实验过程，确保实验结果的可靠性与准确性的重要参照物。β-actin作为一种在大多数细胞中稳定表达的蛋白质，其表达水平相对较高且恒定，因此是Western Blot实验中常用的内参蛋白之一。通过检测β...