α-actin和β-actin在western blot中一直被用作内参。肌动蛋白在细胞中浓度很高,因此为了检测到肌动蛋白量的任何变化,调整上样体积和蛋白质印迹操作流程是很重要的。 细胞生长条件的改变会破坏肌动蛋白的合成。有报道表明beta肌动蛋白在蛋白质印迹分析中可能不是一个可靠的内参。beta肌动蛋白也存在于核内,作为染色...
不论是Western blot还是qPCR,内参的设置首先能够反映出实验过程是不是正常,包括电泳、转膜、发光这些步骤有没有问题。这个时候,内参的作用是充当空白对照。 其次我们再谈定量的问题:我们跑Western blot除了想知道目的蛋白在细胞/组织中是否表达,更重要的是想知道表达量的高低。Western blot条带的灰度值能够帮我们判断目...
β-actin是一种细胞骨架蛋白，在细胞中具有高度保守的表达。它参与了细胞的多种功能，包括细胞运动、分裂等。在Western blot实验中，β-actin也经常作为内参使用，其分子量大约为42kDa左右。β-actin的表达相对稳定，因此其在蛋白质表达研究中也常被用作对照。这两个蛋白由于其特性，在生物...
其次我们要明确待检测基因的亚细胞定位,跑细胞总蛋白的Western blot一般用β-actin和Tubulin等细胞内较稳定表达的蛋白作为内参没什么毛病,但是核蛋白的内参要考虑用Lamin A,Lamin B,histone H3等;膜蛋白的内参一般用N-Cadherin。 EphA1 activation promotes th...
6 做诱导后样本或检测磷酸化等修饰性抗体时,选择结构蛋白作为内参,如 beta Actin 和 beta Tubulin。因为 GAPDH 是代谢类蛋白,表达量有可能会受到诱导处理的影响。7做 Western Blot 实验时,蛋白上样量和内参的条带强度也要适当控制。内参条带不要过度曝光。如果内参条带过度曝光,掩盖样本之间含量差异,妨碍对条带...
其次我们要明确待检测基因的亚细胞定位,跑细胞总蛋白的Western blot一般用β-actin和Tubulin等细胞内较稳定表达的蛋白作为内参没什么毛病,但是核蛋白的内参要考虑用Lamin A,Lamin B,histone H3等;膜蛋白的内参一般用N-Cadherin。 EphA1 activation promotes the homing of endothelial progenitor cells to hepatocellular ...
而beta Actin和beta Tubulin是结构蛋白，不同组织的细胞结构会有差异性。建议事先进行文献查阅和预实验，以确定哪种内参在您的实验条件下最为稳定。没有一个“一刀切”的最佳内参选项，最合适的内参应当基于实验的具体情况来确定。希望这篇指南能帮助您做出明智的选择，确保Western Blot实验结果的可靠性。#蛋白# ...
在Western Blot实验中，β-Actin抗体常常作为内参指数起着关键的作用。简单来说，它就像一个实验中的参照物，帮助评估目的蛋白的检测结果。以下是它在实验中的几个重要作用：首先，β-Actin作为细胞内的“看家基因”，其表达应该是相对稳定的，因此，如果在检测过程中目的蛋白和β-Actin都未检测到，可能...
β-actin抗体是Western Blot很好的内参指数，意味着它在蛋白质研究中有着重要作用。详细解释如下：一、β-actin抗体的作用 在Western Blot实验中，β-actin抗体常被用作内参指数。内参是用于标准化实验过程，确保实验结果的可靠性与准确性的重要参照物。β-actin作为一种在大多数细胞中稳定表达的蛋白质，...
选择内参抗体时,应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KDa以上。比如检测目的蛋白分子量为45KDa,此时不适宜选择β-actin(42KDa)作为内参,可以考虑选择GAPDH(36KDa)作为内参。 二、种属 不同种属的样本内参蛋白不同。