不像组织切片HE染色, 免疫组化和免疫荧光那样可重复(见本人另一文章石蜡切片和冰冻切片之高质量HE染色、免疫组化、免疫荧光染色),Western blot常常被我们叫做"玄学",因为这门技术让人琢磨不透,很难做到结果可重复,明明上了相同体积的同个样品,可常常出现复孔的条带趋势不一致。然而,经过笔者硕士期间反复用心琢磨,...
03、SDS-PAGE凝胶电泳 Western Blot的第二步为电泳,进行电泳是为了将蛋白质按不同分子量大小进行分离,以进行后续的检测。 凝胶电泳需要配置聚丙烯酰胺凝胶,配置凝胶的试剂为:丙烯酰胺-双丙烯酰胺(Arc-Bis)、SDS、Tris-HCl缓冲液、过硫酸铵(APS)、四甲基乙二胺(TEMED)。 在配置好凝胶液时,TEMED会催化APS释放自由...
因此，SDS-PAGE和Western blot虽然都涉及到SDS和聚丙烯酰胺凝胶，但它们在应用上有明显区别。SDS-PAGE主要用于蛋白质的分离，而Western blot则侧重于特定蛋白质的检测。两者结合使用可以更全面地分析蛋白质。在SDS-PAGE过程中，蛋白质被赋予相同的电荷密度，使得分子大小成为决定其迁移率的关键因素。而在Weste...
蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)是将蛋白质经电泳分离后转移到膜上,然后利用抗体进行检测的技术。完整的WB流程,如下图所示,包含样本制备、SDS-PAGE、转膜、抗体结合、蛋白检测等5个大步骤。 样品制备 1、蛋白提取 1)融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1 mM。
表达蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 一、原理 细菌体中含有大量蛋白质,具有不同的电荷和分子量。强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用,通过加热使蛋白质解离,大量的SDS结合蛋白质,使其带相同密度的负电荷,在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)上,不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。采用考马斯亮兰快速染色,可及时观察电泳...
SDS-PAGE凝胶电泳通过将混合的蛋白质样品注入到已凝固的聚丙烯酰胺凝胶中,然后通过电场使蛋白质在凝胶中迁移,从而将其分离出来。 PAGE凝胶的孔隙大小可以调整,在SDS-PAGE中,蛋白质被丙烯酰胺基团偶联的十二烷基硫酸钠(SDS)包裹,使得蛋白质带有负电荷。 通过调整凝胶的孔隙大小和运行条件,可以实现不同大小的蛋白质的分离...
1、SDS-PAGE凝胶的厚度通常为1.0mm和1.5mm，WB实验使用1.0mm厚度的凝胶转印效果较好。2、实验前可通过向组装好的玻璃板中加入双蒸水检查是否漏水，如组装无误但发生了漏水现象，可能是玻璃板或胶条密封性出现了问题，也有可能是架子松动无法卡紧，需及时更换器材，以免实验中出现漏胶现象。三、分离胶和浓缩胶的...
SDS-PAGEandWesternBlot •试剂准备•样品准备•含量测定 •SDS-PAGE •转膜•免疫反应•化学发光•凝胶图像分析 SDS-PAGE •十二烷基磺酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE，polyacrylamidegelelectrophoresis）•聚丙稀酰胺是由丙稀酰胺（acrylamide）和N,N’-亚甲基双丙稀酰胺（N,N’-methylenebis...
SDS-PAGE图提供的是蛋白质的整体分布情况，而Western Blot则侧重于特定蛋白质的表达量检测。两者在实验目的和结果呈现方式上都有显著差异。SDS-PAGE图的制作过程包括蛋白质样本的溶解、变性、电泳分离、染色或荧光染色等步骤。Western Blot则在完成电泳后，将蛋白质从凝胶转移到膜上，再通过抗体进行杂交，...
SDS-PAGE及Western Blot简明操作指南 ⼀．蛋⽩样品制备 推荐使⽤RIPA裂解液。⼀般使⽤强裂解液，对于coIP可⽤弱裂解液。1.准备⼯作：1)取⾜量裂解液，加⼊PMSF和（或）蛋⽩酶抑制剂；若要检测蛋⽩磷酸化，推荐加 ⼊磷酸酶抑制剂。置于冰上预冷。2)准备⾜量PBS，置于冰上预冷。3)提前...