sds page 胶是用来分离蛋白的,而western blot是用sds page 胶分离蛋白后再转膜,然后用一抗二抗孵育,最后显色,出现蛋白条带的一个检测蛋白的方法。00分享举报
SDS-PAGE是一种基于不同分子量分离蛋白的实验方法。Western Blot是一种从蛋白混合物中半定量分析某种特定...
前一个只是把蛋白进行电泳分析，主要用于蛋白纯度分析及分子量分析，主要用于定性；后者则是在前者的基础上又经过了转膜及杂交等步骤，用于分析特定蛋白的表达多少的。
经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋...
二、蛋白质印迹免疫分析(Western Blot) 1、蛋白质转膜 (1)取下胶板,小心去除一侧玻璃板,切去浓缩胶和分离胶无样品的部分,将凝胶分成两半,含分子量标准的部分用考马斯亮蓝染色。 (2)精确测量剩余胶的大小,按该尺寸剪取一张硝酸纤维素膜和两张滤纸(BioRad专用),在转移缓冲液中将膜和滤纸浸泡15分钟。
三、Western Blot 1.在跑胶过程中,配置好半干转膜液(纯水:无水乙醇:5XTransfer Buffer=3:1:1)和封闭液(脱脂奶粉1.5g+TBST30ml); 2.提前把两块白色厚滤纸泡在转膜液中,另取一个小槽,倒入少许转膜液备用; 3.电泳结束后,拿出带胶的玻璃板放置在桌面上,用工具轻轻撬开玻璃板,根据Marker确定好目的蛋白位置,切...
(1)SDS-PAGE法的操作步骤示意图 (2)Western Blot法的操作步骤示意图 2.操作视频 0 三.实验结果处理与分析 在SDS-PAGE实验过程结束后,我们可以通过考马斯亮蓝染色法去观察条带的位置,也可以不经过考马斯亮蓝染色直接进行转膜和Western Blot的操作。在加入显色液之后,大约10到30分钟之后,我们就可以观察到显现出来...
免疫荧光、SDS-PAGE、Western-blot实验技术 免疫荧光技术SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）Westernblotting实验技术 一、免疫荧光技术 基本原理：免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检测组织或细胞内的相应抗原（或抗体）。在...
1、SDS-PAGE凝胶电泳及Western blot 检测技术,SDS-PAGE凝胶电泳,实验原理 实验步骤 注意事项 电印迹 SDS-PAGE的优点 SDS-PAGE的缺点 实验常见问题及处理 小技巧,实验原理,背景 基本原理 分类 分离范围 实验中各成分作用,背景,1967年由Shapiro建立。 1969年由Weber和Osborn进一步完善。 他们发现样品介质和丙烯酰胺凝胶...