1.siRNA序列不宜过长,超过30nt易导致其与其他mRNA非特异性结合,一般以19-25nt之间为宜。 2.GC含量控制在35-55%之间,基因沉默效果最好。 3.siRNA序列设计的靶序列一般为目的基因的CDS序列。 4.一般siRNA需设计2-4条,另需要对照1-2条,序列设计完成后需要在BLAST中(BLAST: Basic Local Alignment Search Tool ...
小干扰RNA(siRNA)能诱导特定基因转录出的mRNA降解,导致基因沉默。目前制备siRNA的方法中,最常见的是以质粒为载体,依赖一个启动子控制一段反向重复序列R转录,在细胞内生成短发夹RNA(shRNA),随后shRNA被特异核酸酶剪切成siRNA(如图1),该载体被称为shRNA表达载体。科研人员对实验室常用的普通载体进行改造,构建了含有双...
siRNA 疗法还有两个有助于长效作用的特点：它们被带入细胞，然后保留在称为内体的球形囊泡内，然后将siRNA 释放到细胞质中；并且它们在 RNA 诱导的沉默复合物 (RISC) 内具有催化活性，允许单个siRNA 诱导多个 mRNA 分子的降解。siRNA vs. 基因疗法：“短暂性”的好处由于 siRNA 靶向基因而不是蛋白质，因此它们经...
原始的siRNA片段一旦进入人体,就会被细胞和组织中存在的大量核酸酶等给迅速降解掉,被降解后的siRNA就只能是一堆“垃圾”,不可能发挥出任何功效。 另外,即便没有降解的siRNA,也很容易被引起人体免疫系统识别吞噬,被内皮系统捕获,或者被随尿液等排出体外,同样无法到达靶基因位点发挥功效。 除了这两个问题,siRNA药物还有...
siRNA靶向基因沉默的机制可以分为三个主要的步骤:siRNA的合成与运输、RISC复合物的组装以及基因沉默。 首先,siRNA的合成与运输是整个过程的起点。siRNA可以通过合成或者从外源性源头获取。无论是通过合成还是外源性获取,siRNA都需要通过细胞膜进入到细胞质中。通常情况下,siRNA会与载体结合形成复合物,通过细胞膜的内吞作...
RNA 干扰 (RNAi) 是一种进化上保守的基因表达沉默机制。化学合成的短干扰 RNA (siRNA) 可用于在培养的哺乳动物细胞中诱导沉默。
siRNA 介导哺乳动物基因沉默 1 导言 在人类基因组(30 亿 bp) 中, 约有 3-4 万个编码蛋白的基因, 但一半以上基因的功能仍不清楚。 一项全新的技术—siRNA(small interfering RNAs) 技术—已用来系统研究数以千计的基因功能及相互关系。 SiRNA 是 RNAi 的介导者之一, 它通过 dsRNA 使同源基因沉默。 用 siRNA...
RNA干扰(RNAi)是有效沉默或抑制目标基因表达的过程,该过程通过双链RNA(dsRNA)使得目标基因相应的mRNA选择性失活来实现的。RNA干扰由转运到细胞细胞质中的双链RNA激活。沉默机制可导致由小干扰RNA(siRNA)或短发夹RNA(shRNA)诱导实现靶mRNA的降解,或者通过小RNA(miRNA)诱导特定mRNA翻译的抑制。这篇综述将重点介绍shRNA...
首先,siRNA的设计是成功实现基因沉默的关键步骤。有效的siRNA通常由20到25个核苷酸组成,长度适宜能够确保其特异性地与目标mRNA结合并促进降解。设计时,应遵循一些基本原则。例如,尽量避免使用超过30个核苷酸的序列,以减少与其他mRNA的非特异性结合。此外,siRNA的GC含量应控制在35%至55%之间,这样有助于提高沉默效果。一...
导读:本文主要分享在mRNA水平或蛋白水平上验证基因沉默的效果。siRNA转染后一定时间内,需采用基本方法验证其转染效率,常见验证方式包括Western blot、RT-PCR、流式细胞术及ELISA等,对于含有荧光的质粒,也可采用荧光显微镜直接观察的方式来大致确定转染效率。一般来说,由于转染后的细胞常用于功能学实验,因此应该选用可以...