4.一般siRNA需设计2-4条,另需要对照1-2条,序列设计完成后需要在BLAST中(BLAST: Basic Local Alignment Search Tool (http://nih.gov)进行比对,选择与靶基因特异性结合的序列进行合成即可。 上述原则是在设计siRNA时可以选择的一些参数,此外还有较为细节的原则如siRNA序列选择的位置、开始的碱基及序列及避免碱基单一...
基因沉默实验:siRNA转染效率验证。siRNA转染后一定时间内,需采用基本方法验证其转染效率,常见验证方式包括Western blot、RT-PCR、流式细胞术及ELISA等,对于含有荧光的质粒,也可采用荧光显微镜直接观察的方式来大致确定转染效率。一般来说,由于转染后的细胞常用于功能学实验,因此应该选用可以确定其转染效率的方法一、mRNA水...
基因沉默实验siRNA设计和转染详解汇总 一、siRNA设计 小干扰RNA(Small interfering RNA;siRNA)是一段长度在20-25个核苷酸之间的RNA双链,其生物应用较多,目前主要用于干扰RNA,达到调节基因表达(敲减)的目的,其本质是siRNA和相应的mRNA特异性结合、降解,继而实现阻滞mRNA继续翻译的目的。 设计原则: 1.siRNA序列不宜过长...
基因沉默实验:siRNA转染效率验证 siRNA转染后一定时间内,需采用基本方法验证其转染效率,常见验证方式包括Western blot、RT-PCR、流式细胞术及ELISA等,对于含有荧光的质粒,也可采用荧光显微镜直接观察的方式来大致确定转染效率。一般来说,由于转染后的细胞常用于功能学实验,因此应该选用可以确定其转染效率的方法,本文主要分...
1. siRNA的设计是决定RNAi实验成败关键性的第一步。 并非每个siRNA都能有效引发基因沉默。和引物设计一样,设计有效的siRNA也有一些经过前人经验总结出的规则,而且这些规则随着对siRNA研究的深入也在不断完善之中。有一些开放的免费在线工具可用。付费的软件成功率比较高,3个保证中2个。
本研究比较细胞系同源重组基因敲除(geneknockout)与siRNA基因沉默(genesilence)二种技术方法用于研究蛋白功能方面的效果差异.对鸡B淋巴细胞瘤来源的DT40细胞系,应用基因打靶技术分离出Sam68基因缺失的细胞株,并且利用稳定表达siRNA的质粒pSilencer-Sam68得到Sam68基因沉默的
目的:观察siRNA联合介导 Livin和Survivin基因的沉默诱导人肾癌细胞786-O化疗敏感性的作用.方法:构建Livin和Suvivin联合靶向的小干扰 RNA(siRNA)重组表达载体shRNA,然后将目的载体转染于人肾癌细胞株786-O.应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)及Western blot方法分别检测转染前细胞经顺铂,5-FU和丝裂霉素处理...
SiRNA and miRNA gene silencing : from bench to besides = siRNA和miRNA介导的基因沉默 : 从实验室到临床 RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)是实现基因沉默的有效工具。近年来,随着分子生物学与生物技术的快速发展,在RNAi基础上又发展出另一种特异性更高的基因沉默技术-am... MouldySioud - SiRNA and miRNA...
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1.siRNA序列不宜过长,超过30nt易导致其与其他mRNA非特异性结合,一般以19-25nt之间为宜。 2.GC含量控制在35-55%之间,基因沉默效果最好。 3.siRNA序列设计的靶序列一般为目的基因的CDS序列。 4.一般siRNA需设计2-4条,另需要对照1-2条,序列设计完成后需要在BLAST中(BLAST: Basic Local Alignment Search Tool ...