3.换液: 助转染试剂(如lipo2000)具有一定细胞毒性,所以需要在质粒或siRNA转染细胞4~8h后及时换液(将无血清培养基更换为完全培养基)。 4.检测:在成功转染24~48小时后,将细胞从培养箱中取出,可进行后续相关检测。 三、转染效率的验证 细胞转染效率的高低是该实验成败与否的关键。对于转染效率的验证,建议在安排转...
细胞转染:以Lip2000作为转染试剂为例,在转染前更换细胞培养基(无双抗,无血清),用Opti-MEM稀释质粒或siRNA,另用Opti-MEM稀释Lip2000,将两者配好静置2~3分钟后,混匀在同一个管内,避免粗暴用力吹打(因为有可能会导致脂质体失效),静置3~5分钟后,将配好的转染溶液加到细胞培养板中,并轻轻晃匀。 换液:助转染试剂...
采用质粒的优点在于,通过siRNA表达质粒的选择标记,siRNA载体能够更长时间地抑制目的基因表达。当然还有一点,那就是由于质粒可以复制扩增,相比起其它合成方法来说,这就能够显著降低制备siRNA的成本。 带有抗生素标记的siRNA表达载体可用于长期抑制研究,通过抗性辅助筛选,该质粒可以在细胞中持续抑制靶基因的表达数星期甚至更久...
原理：细菌载体介导法是利用一些经过改造的细菌作为载体，将 siRNA 传递到细胞内。例如，利用减毒的沙门氏菌或大肠杆菌等细菌，将携带 siRNA 的表达质粒导入细菌内，然后通过细菌感染细胞的方式将 siRNA 传递到细胞中。在细胞内，siRNA 可以从表达质粒中转录出来，发挥基因沉默作用。操作步骤 细菌载体构建：将含有 siRN...
RFect系列质粒DNA转染试剂专门用于质粒DNA的转染，具有非常卓越的转染性能，可高效转染绝大多数贴壁细胞、原代细胞和悬浮细胞。其中，RFect质粒DNA转染试剂主要用于贴壁细胞的质粒转染，转染效率在贴壁细胞中可高达90%以上，完全媲美Lipofectamine3000的质粒转染效率。RFect悬浮细胞质粒DNA转染试剂主要应用于悬浮细胞的质粒DNA转染...
1、脂质体:Lipofectamine RNAiMAX 转染试剂(4℃保存)(或其他转染试剂) 2、siRNA:转染级质粒 3、无血清培养基:optimen 4、贴壁细胞(复苏后3代以上的细胞) 5、6孔板 6、DEPC水 二、具体步骤 第一天: 1、种板(使得第二天细胞密度达到50-60%) 第二天 ...
早期,研究者在做siRNA转染实验时,市面上还没有专门针对siRNA转染的试剂产品,因此,常常只能选择lipofectamine2000、 lipofectamine3000等主要针对质粒DNA转染的试剂来进行siRNA转染实验,这些转染试剂确实能对部分细胞进行有效的siRNA转染,但在很多细胞的siRNA转染效果上,却表现平平,并且细胞毒性很大,这就是为人熟知的第一代siR...
P-bodies）的翻译抑制，行使RNA干扰功能。shRNA 表达载体：①shRNA质粒表达载体，转染细胞后转录生成shRNA，利用细胞内的Dicer酶，生成相应的siRNA，发挥RNAi作用。②shRNA病毒表达载体，常用的病毒载体有腺病毒载体、腺相关病毒载体、慢病毒载体等，机制与质粒载体相似，但转染细胞的效率比较高。siRNA和shRNA的区别 ...
siRNA和质粒转染有何区别四一个是rna一个是dnasirna的功能是有一定时限的不可能长时间时限沉默功能而质粒转然之后只要不出现质粒丢失现象是可以长时间实现功能的另外他们两个的转染试剂可能也不同一般sirna有专门的特异性转染试剂目的是为了实现更高的转染效率五用sirna就只能做到瞬时干扰掉靶基因没做一次实验都要干扰...
1. **细胞铺板**：通常在转染前一天进行，根据细胞生长速度计数后铺板，确保第二天转染时细胞密度达到80%~90%左右，以提高转染效率。2. **细胞转染**：以lip2000为例，转染前更换无双抗、无血清的细胞培养基。用opti-mem稀释质粒或siRNA，同时用opti-mem稀释lip2000。将两者混合静置2~3分钟后，轻轻...