它们包括锁定靶基因的双链RNA（siRNA或shRNA）、Dicer酶，Argonaute蛋白家族的蛋白质（具体来说是Ago-2）、Drosha、RISC、TRBP和PACT。表一：RNAi机制的主要组成元件 siRNA vs. shRNA作用机制 两个在RNAi途径的基因沉默中具有实质利害关系的是双链小干扰RNA（siRNA）和基于载体的短发夹RNA（shRNA）。虽然siRNA和shR...
shRNA是可以克隆至表达载体并表达双链siRNA的RNA分子,包括两个短反向重复序列,中间由一茎环序列分隔,形成发夹结构,由polⅢ启动子控制。相对于siRNA,shRNA在细胞核中合成,进一步加工并运输到细胞质中,然后进入RISC发挥活性。miRNA的合成与成熟研究为shRNA的合成,特别是基于miR-30的shRNA的合成提供了基础。 shRNA的结...
siRNA进入细胞,被整合到其他蛋白质中以形成RNA诱导的沉默复合物(RISC),然后siRNA就展开形成单链siRNA,单链siRNA可以扫描并找到互补的mRNA,诱导mRNA切割,导致mRNA的降解,阻止mRNA翻译成蛋白质,从而沉默编码该mRNA的基因。 RNA干扰过程中,siRNA和mR...
RNA干扰(RNAi)是有效沉默或抑制目标基因表达的过程,该过程通过双链RNA(dsRNA)使得目标基因相应的mRNA选择性失活来实现的。RNA干扰由转运到细胞细胞质中的双链RNA激活。沉默机制可导致由小干扰RNA(siRNA)或短发夹RNA(shRNA)诱导实现靶mRNA的降解,或者通过小RNA(miRNA)诱导特定mRNA翻译的抑制。这篇综述将重点介绍shRNA...
从结构和定义上可以看出,siRNA、shRNA和miRNA的基本异同点主要有3个: 1、三者的成熟体都是长度在20-25nt的小RNA,siRNA是3’端有两个游离的碱基,5’端有磷酸基团的双链RNA,shRNA经过加工形成siRNA,miRNA则最终形成单链RNA。 2、siRNA一般是人工合成的线性双链RNA(dsRNA),shRNA、miRNA则是通过发卡结构形成的局...
siRNA和shRNA的作用机制 两个在RNAi途径的基因沉默中具有实质利害关系的是双链小干扰RNA(siRNA)和基于载体的短发夹RNA(shRNA)。虽然siRNA和shRNA(图1)都可用于蛋白沉默,但它们的作用机制有所不同(图2)。 不管是长的双链RNA还是短的约21bp碱基对的双链...
shRNA是可以克隆至表达载体并表达双链siRNA的RNA分子,包括两个短反向重复序列,中间由一茎环序列分隔,形成发夹结构,由polⅢ启动子控制。相对于siRNA,shRNA在细胞核中合成,进一步加工并运输到细胞质中,然后进入RISC发挥活性。miRNA的合成与成熟研究为shRNA的合成,特别是基于miR-30的shRNA的合成提供了基础。
（A）siRNAs是双链RNA，在3‘端有两个碱基的游离。（B）shRNA由正义链和反义链通过环状序列隔开共同组成。（C）shRNA 构建用于插入表达载体。siRNA作用机制 siRNA是直接化学合成的双链小干扰RNA，通常在细胞质中聚集。siRNA片段进入细胞后与RISC结合，RISC由Argonaute-2（Ago-2）、Dicer和TAR-RNA-结合蛋白（TRBP...
脱靶可能与模体匹配、结构和长 CSRNA 等有关。 shRNA: 短发夹RNA(short hairpin RNA),是一种依赖茎环序列产生的短双链RNA结构(19-25nt),可利用载体导入细胞当中,在细胞中经酶切形成siRNA,通过RNA干扰途径调控目标基因。有证据表明shRNA的脱靶效应比siRNA的少。
说起siRNA、shRNA和miRNA就不得不提RNA干扰(RNA interference,RNAi),它是指由一段短双链RNA引起的基因沉默现象。1998年,Andrew Z. Fire等在实验中发现,单独使用纯化的正义RNA链或者反义RNA,不能导致秀丽隐杆线虫的肌肉抽搐,作为对照加入的双链RNA则具有极强的抽搐..