RNA干涉（RNAi）在实验室中是一种强大的实验工具，利用具有同源性的双链RNA（dsRNA）诱导序列特异的目标基因的沉寂，迅速阻断基因活性。siRNA在RNA沉寂通道中起中心作用，是对特定信使RNA（mRNA）进行降解的指导要素。siRNA是RNAi途径中的中间产物，是RNAi发挥效应所必需的因子。siRNA和shRNA的作用机制 （图2）图2：si...
shRNA 通常由一个茎环结构（由互补的双链 RNA 区域和一个环状区域组成）和两端的单链 RNA 区域构成。在细胞内，shRNA 被 Drosha 和 Dicer 等酶切割加工，最终形成能够介导 mRNA 降解的 siRNA 样分子，进入 RISC 复合物发挥作用。miRNA（微小 RNA）miRNA 是一类内源性的非编码 RNA，长度约为 20 - 24 个...
根据驱动表达的启动子的不同,shRNA可被RNA聚合酶II(如:CMV,EF1A等)或者RNA聚合酶III(如:U6,H1)催化转录。在被Exportin-5转运到细胞质之前,这些初始的前体结构需要首先用Drosha及其双链RNA结合伴侣DGCR8加工形成pre-shRNA(参考前文:miRNA的功能及其作用机制)。pre-shRNA随后被Dicer和TRBP/PACT酶切,去除发卡结构,...
而miRNA 与 siRNA 的不同点: 1.根本区别是 miRNA 是内源的,是生物体的固有因素;而 siRNA 是人工体外合成的,通过转染进入人体内,是 RNA 干涉的中间产物。 2.结构上,miRNA 是单链 RNA ,而 siRNA 是双链 RNA。 3.Dicer 酶对二者的加工过程不同,miRNA 是不对称加...
shRNA的发卡结构可被细胞机制切割成siRNA,然后siRNA结合到RNA诱导沉默复合物上(RNA-induced silencing complex,RISC),该复合物能够结合到目的mRNAs并将其降解。 shRNA 是由RNA 聚合酶Ⅲ转录的,哺乳细胞中的shRNA产物有时会促使细胞产生干扰素反应(细胞遇到病毒侵袭时做出的自我防卫反应),而miRNA中却不会遇到这种问题(...
MiRNA-biogenesis.jpg ② 干扰小RNA(small inerfering RNA, siRNA) 定义:小分子干扰核糖核酸(英语:small interfering RNA,缩写为siRNA),又译为小干扰核糖核酸。siRNA通常是一段长21个核苷酸的双股RNA(dsRNA),其两股分别在RNA的两端超出另一端2个核苷酸。
沉默机制可导致由小干扰RNA(siRNA)或短发夹RNA(shRNA)诱导实现靶mRNA的降解,或者通过小RNA(miRNA)诱导特定mRNA翻译的抑制。通过短反义核酸(siRNA和shRNA序列)锁定细胞mRNA,从而实现其随后的降解。这反过来阻断了该蛋白的进一步表达/聚集,导致其水平的下降,最终...
siRNA是最早用于RNA干扰的工具,能在细胞内产生快速、短暂的基因沉默,适合便于转染或电穿孔转化的细胞。因此对于想快速获得结果的体外实验首选siRNA。 shRNA克服了siRNA作用时间短的局限性,能够在体外建立较稳定的基因干扰,借助病毒转染媒介使其更适合难转染的细胞系和动物模型构建,同时基于miRNA结构的shRNA干扰载体可由...
从结构和定义上可以看出,siRNA、shRNA和miRNA的基本异同点主要有3个: 1、三者的成熟体都是长度在20-25nt的小RNA,siRNA是3’端有两个游离的碱基,5’端有磷酸基团的双链RNA,shRNA经过加工形成siRNA,miRNA则最终形成单链RNA。 2、siRNA一般是人工合成的线性双链RNA(dsRNA),shRNA、miRNA则是通过发卡结构形成的局...
通过与miRNA的加工相同的RNAi机制,shRNA被加工成siRNA。使用细菌或病毒载体,shRNA被导入靶细胞的细胞核内,在某些情况下,载体可以稳定地整合到基因组中。根据驱动表达的启动子的不同,shRNA可被RNA聚合酶II或者III催化转录。在被Exportin-5转运到细胞质之前,这些初始的前体结构需要首先用Drosha及其双链RNA结合伴侣DGCR8...