western blot是通过聚丙烯酰胺电泳(SDS PAGE)将蛋白质按照分子量大小分离,再转移到膜上,最后通过一抗、二抗以及显色液对蛋白进行特异性标记的方法。今天给大家分享一下实验过程中的小细节～♥️样品处理细胞样品加入裂解液后冰浴10min,用枪头搅几圈后吸出至新的EP管中。组织样本剪碎后加入裂解液冰上超声,直至...
与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺 凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过 PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载 体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不 变。以固相载体上的蛋白质...
(1)当我们把混合样品通过SDS-PAGE电泳分离之后,理论上可以通过所得条带的分子量来鉴定目的蛋白是否存在,但是这种鉴定受到很多因素的干扰,非常不准确。因此我们需要进一步使用Western blot (蛋白质印迹法)来鉴定血清中的IgG含量的多少。 凝胶上的蛋白质条带 (2)Western blot属于印迹法,是样品经过电泳分离后,转印至膜...
(1)转印缓冲液:Tris 5.8g、甘氨酸2.9g、10%(v/v)甲醇、SDS 0.37g、甲醇200ml使用蒸馏水定容至1L,pH 8.3,4℃保存。 (2)SDS-PAGE电泳结束后取出凝胶,只需要分离胶部分,浸泡在转印缓冲液中10-30 min。 (3)将滤纸浸泡在转印缓冲液中至少30 s。 (4)转印膜在甲醇中浸泡30s,完全浸湿,接着放入去离子水中浸...
三、Western Blot 1.在跑胶过程中,配置好半干转膜液(纯水:无水乙醇:5XTransfer Buffer=3:1:1)和封闭液(脱脂奶粉1.5g+TBST30ml); 2.提前把两块白色厚滤纸泡在转膜液中,另取一个小槽,倒入少许转膜液备用; 3.电泳结束后,拿出带胶的玻璃板放置在桌面上,用工具轻轻撬开玻璃板,根据Marker确定好目的蛋白位置,切...
SDS-PAGE及WesternBlot简明操作指南.docx,SDS- 及 WesternBlot 简明操作指南 SDS- 及 Western Blot 简明操作指南一.蛋白样品制备 推举使用 RIPA 裂解液。一般使用强裂解液,对于 coIP 可用弱裂解液。 预备工作: 1)取足量裂解液,参加 PMSF 和〔或〕蛋白酶抑制剂;假设要检
免疫荧光技术SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）Westernblotting实验技术 一、免疫荧光技术 基本原理：免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗体，再用这种荧光抗体（或抗原）作为探针检测组织或细胞内的相应抗原（或抗体）。在组织或细胞内形成的抗原抗体复合物上含有标记...
SDS-PAGEWesternBlot SDS-PAGEandWesternBlot •试剂准备•样品准备•含量测定 •SDS-PAGE •转膜•免疫反应•化学发光•凝胶图像分析 SDS-PAGE •十二烷基磺酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE，polyacrylamidegelelectrophoresis）•聚丙稀酰胺是由丙稀酰胺（acrylamide）和N,N’-亚甲基双丙稀酰胺（N,N...
前一个只是把蛋白进行电泳分析，主要用于蛋白纯度分析及分子量分析，主要用于定性；后者则是在前者的基础上又经过了转膜及杂交等步骤，用于分析特定蛋白的表达多少的。
SDS-PAGE及Western Blot简明操作指南 ⼀．蛋⽩样品制备 推荐使⽤RIPA裂解液。⼀般使⽤强裂解液，对于coIP可⽤弱裂解液。1.准备⼯作：1)取⾜量裂解液，加⼊PMSF和（或）蛋⽩酶抑制剂；若要检测蛋⽩磷酸化，推荐加 ⼊磷酸酶抑制剂。置于冰上预冷。2)准备⾜量PBS，置于冰上预冷。3)提前...