• 解决方案:小心取下玻璃板,避免分离,上样时避免枪头插得太深。9. 泳道中心凹陷:• 原因:梳子插入后胶暴露于空气中时间过长。• 解决方案:尽量在 25 分钟内插入梳子,避免长时间暴露。结语 通过详细了解SDS-PAGE凝胶的配制方法及常见问题的解决方案,实验者可以有效提高实验成功率,减少误操作,从而获...
表2. 配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶所用溶液 成分 配制不同体积和浓度凝胶所需各成分的体积/ml 1 2 3 4 5 6 8 10 水 0.68 1.4 2.1 2.7 3.4 4.1 5.5 6.8 30 %丙烯酰胺混合液 0.17 0.33 0.5 0.67 0.83 1.0 1.3 1.7 1.5 mol/L Tris(pH6.8) 0.13 0.25 0.38 0.50 0.63 0.75 1.0 1.25 ...
SDS-PAGE自制胶操作规程 一:试剂准备 SDS-PAGE电泳所用溶液: 30 %聚丙烯酰胺溶液(100 mL) 丙稀酰胺(Arc)29.2g,N-N-甲叉双丙稀酰胺(Bis)0.8g,加入去离子水定容至100mL,过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存。将商品用的40 %聚丙烯酰胺溶液稀释到浓度为30 %,冰箱4℃保存。 分离胶缓冲液1.5mol/L Tris·HCl,pH8.8:...
( 1 )在制板支架上置一专用有机玻璃槽,将固定好的玻璃板下部插入槽内,中部用两个文具夹固定在支架竖板上。在槽内倒入已充分溶化的琼脂,冷凝后封闭胶腔底部。 ( 2 )用直径约 2mm 的聚乙烯管连接好梯度混合器、恒流泵、凝胶模。 ( 3 ) 30% 胶液的配制取 50ml 烧杯一只,加凝胶贮液① 14ml ,水 14ml,...
以下是制作SDS-PAGE凝胶的基本配方和制胶步骤: 配方: 1. 1%丙烯酰胺(Acrylamide)溶液:将3.7g丙烯酰胺和60μl N,N'-亚甲基双丙烯酰胺溶解在0.5ml双蒸水中,搅拌均匀。 2. 2.5%BT(Bis-Tris)溶液:将0.1g BT和0.25ml TBE(三酸乙酸盐电泳缓冲液)混合均匀。 3. 10%过硫酸铵(AMS)溶液:将10μl AMS溶解在1...
③ 按如下体积配制10%分离胶8.0 ml,混匀:ddH2O 3.0 ml;1.0 mol/LTris-HCl pH=8.8 2.1 ml;30% Acr-Bis 2.8 ml;10% SDS 80 ul;10%AP 56 ul;TEMED 6 ul。 ④ 向玻璃板间灌制分离胶,立即覆一层重蒸水,大约20 min后胶即可聚合; ⑤ 按如下体积配制6%浓缩胶3.0 ml,混匀:ddH2O 1.0 mol/LTris-...
sds-page配方 SDS-PAGE 电泳 8%分离胶5ml 7.5ml 10ml H2O 2300(微升,下面都一样)3450 4600 30%Acrylamide 1300 2025 2700 1.5M Tris-HCl (Ph8.8) 1300 1875 2500 10%SDS 50 75 100 10%过硫酸铵50 75 100 TEMED 3 4.5 6 12%分离胶5ml 7.5ml 10ml H2O 1600 2475 3300 30%Acrylamid...
SDS-PAGE凝胶制备属于实验室最常规的操作了,刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方,这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。 1. 分离胶(12%) 配制 所需试剂 所需体积 分离胶(12%) ...
1) 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,再按照下面的表格配制 SDS-PAGE 的 分离胶<即下层胶>: 1/8 . SDS- 最 PAGE 佳 分离 分 胶浓 离 度 范 围 6%胶 50- 150 kD 8%胶 30- 90k D 2/8 . 10% 胶 12% 胶 15% 胶 20- 80k D 12- 60k D 10- 40k D 成分 配制不同体积 SDS-...