• 解决方案：小心取下玻璃板，避免分离，上样时避免枪头插得太深。9. 泳道中心凹陷：• 原因：梳子插入后胶暴露于空气中时间过长。• 解决方案：尽量在 25 分钟内插入梳子，避免长时间暴露。结语 通过详细了解SDS-PAGE凝胶的配制方法及常见问题的解决方案，实验者可以有效提高实验成功率，减少误操作，从而获...
( 1 )在制板支架上置一专用有机玻璃槽,将固定好的玻璃板下部插入槽内,中部用两个文具夹固定在支架竖板上。在槽内倒入已充分溶化的琼脂,冷凝后封闭胶腔底部。 ( 2 )用直径约 2mm 的聚乙烯管连接好梯度混合器、恒流泵、凝胶模。 ( 3 ) 30% 胶液的配制取 50ml 烧杯一只,加凝胶贮液① 14ml ,水 14ml,...
② 将两块洗净的玻璃板之间加入Spacer,按照Bio-Rad Mini Ⅱ/Ⅲ说明书提示装好玻璃板; ③ 按如下体积配制10%分离胶8.0 ml,混匀:ddH2O 3.0 ml;1.0 mol/LTris-HCl pH=8.8 2.1 ml;30% Acr-Bis 2.8 ml;10% SDS 80 ul;10%AP 56 ul;TEMED 6 ul。 ④ 向玻璃板间灌制分离胶,立即覆一层重蒸水,大约2...
而在配胶时浓缩胶只加前三个组分,混合液要于4℃冰箱保存,待分离胶凝固后再取出加入AP和TEMED溶液,枪头搅拌均匀,灌胶后插入梳子,然后于37℃凝固15-30 min。凝固的胶连带其附着的玻璃板用塑料薄膜严密包裹可在4℃冰箱保存2-4天,长时间保存易干胶,要重新做胶...
SDS-PAGE凝胶制备属于实验室最常规的操作了,刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方,这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。 1. 分离胶(12%) 配制 所需试剂 所需体积 分离胶(12%) ...
一、SDS-PAGE 凝胶制备 1、玻璃板梳子的清洁 先用自来水浸泡5分钟,洗洁精清洗,注意厚玻璃板两侧沟槽容易残留胶,可以用尖锐的东西轻刮,然后用自来水冲洗干净泡沫,再用纯水冲洗即可,37度烘干或者吹风筒吹干,注意别用热风长时间近距离吹,厚玻璃板两侧的边条是用粘胶粘在一起的,高热会使粘胶融化,久而久之可能引起密闭...
下面我们将介绍SDS-PAGE电泳试剂的配制方法。 聚丙烯酰胺凝胶电泳胶液配制 1. 将蒸馏水取2L,通过0.22μm的滤膜过滤3遍来除杂质,备用。 2. 将40%(w/v)丙烯酰胺10mL,在干燥器中烘干2小时,然后加入蒸馏水固定容积至50mL。将10%(w/v)N, N’-二甲基亚硫脲5mL加入均聚化溶液中,搅拌30分钟至完全溶解。 3. ...
SDS-PAGE自制胶操作规程 一:试剂准备 SDS-PAGE电泳所用溶液: 30 %聚丙烯酰胺溶液(100 mL) 丙稀酰胺(Arc)29.2g,N-N-甲叉双丙稀酰胺(Bis)0.8g,加入去离子水定容至100mL,过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存。将商品用的40 %聚丙烯酰胺溶液稀释到浓度为30 %,冰箱4℃保存。 分离胶缓冲液1.5mol/L Tris·HCl,pH8.8:...
sds-page 试剂配制 SDS-PAGE 试剂配制 凝胶脱色染色方法：溶液1：无水乙醇250mL，冰醋酸50mL，水200mL；溶液2：无水乙醇50mL，冰醋酸37.5mL，水437.5mL；溶液3：0.25g考马斯亮蓝R-250 溶于100mL 95%乙醇中，滤纸过滤，待用。电泳结束，取出胶放在胶盒中，加约50mL溶液1，微波炉加热1min，摇床摇10-20nin；...