8. 上层胶中电泳出现“漏样”：• 原因：玻璃板与胶局部分离，上样缓冲液问题。• 解决方案：小心取下玻璃板，避免分离，上样时避免枪头插得太深。9. 泳道中心凹陷：• 原因：梳子插入后胶暴露于空气中时间过长。• 解决方案：尽量在 25 分钟内插入梳子，避免长时间暴露。结语 通过详细了解SDS-PAGE凝胶...
下面我们将介绍SDS-PAGE电泳试剂的配制方法。 聚丙烯酰胺凝胶电泳胶液配制 1. 将蒸馏水取2L,通过0.22μm的滤膜过滤3遍来除杂质,备用。 2. 将40%(w/v)丙烯酰胺10mL,在干燥器中烘干2小时,然后加入蒸馏水固定容积至50mL。将10%(w/v)N, N’-二甲基亚硫脲5mL加入均聚化溶液中,搅拌30分钟至完全溶解。 3. ...
接下来是浓缩胶缓冲液,通常是10M TrisHCl(pH 68)。同样配制100ml,称取1211g Tris碱,加入约80ml去离子水,用浓盐酸调pH至68,最后定容至100ml。 然后是30%丙烯酰胺溶液。这是SDSPAGE电泳中非常重要的试剂。配制100ml该溶液,需要称取29g丙烯酰胺和1g N,N’亚甲双丙烯酰胺,用去离子水溶解后定容至100ml。丙烯酰...
而在配胶时浓缩胶只加前三个组分,混合液要于4℃冰箱保存,待分离胶凝固后再取出加入AP和TEMED溶液,枪头搅拌均匀,灌胶后插入梳子,然后于37℃凝固15-30 min。凝固的胶连带其附着的玻璃板用塑料薄膜严密包裹可在4℃冰箱保存2-4天,长时间保存易干胶,要重新做胶...
0.01 MNaOAc (pH5.2) 参照此配方配制。5×Tris-Glycine Buffer（SDS-PAGE电泳缓冲液）组分浓度：0.125 M Tris, 1.25 M Glycine, 0.5%(W/V) SDS 1．称量下列试剂置于烧杯中。2．加入约900 ml去离子水搅拌溶解。3．定容至1L，室温保存。（参照《分子克隆》二版P884）Transfer Buffer:[自配]Transfer ...
SDS-PAGE电泳试剂配制SDS-PAGE电泳试剂 1)30%贮备胶溶液:丙烯酰胺(Acr)29.0g,亚甲基双丙烯酰(Bis)1.0g,混匀后加ddH 2O,37OC溶解,定容至100 mL,棕色瓶存于4OC; 2)1.5M Tris-HCl(pH:Tris 18.17g加ddH 2O溶解,浓盐酸调pH至,定容至100mL;3)1M Tris-HCl(pH:Tris 12.11g加 ddH 2O溶解,浓盐酸调pH...
浓缩胶缓冲液的pH值通常为68,同样使用TrisHCl缓冲液。配制方法与分离胶缓冲液类似,但Tris的用量和浓盐酸的用量有所不同。每升浓缩胶缓冲液中,Tris的用量约为606g,浓盐酸的用量也需要根据实际pH值测量结果进行微调。 然后是30%丙烯酰胺溶液的配制。这是SDSPAGE电泳中的关键试剂之一。丙烯酰胺是一种有毒物质,在...
3.浓缩胶的配制,以4%浓缩胶为例,配方如下: 将上述试剂充分混合后倒入两玻璃板之间的夹缝中,然后将1mm宽的梳子插入浓缩胶中,请确保梳子与浓缩胶之间没有任何气泡。当浓缩胶完全凝固后,小心地将梳子取出。 4. 电泳槽的组装 将制备好的分离胶及浓缩胶放于电泳槽内(注意小玻璃板朝向内部,大玻璃板朝向外部),然后...