• 解决方案:小心取下玻璃板,避免分离,上样时避免枪头插得太深。9. 泳道中心凹陷:• 原因:梳子插入后胶暴露于空气中时间过长。• 解决方案:尽量在 25 分钟内插入梳子,避免长时间暴露。结语 通过详细了解SDS-PAGE凝胶的配制方法及常见问题的解决方案,实验者可以有效提高实验成功率,减少误操作,从而获...
( 1 )在制板支架上置一专用有机玻璃槽,将固定好的玻璃板下部插入槽内,中部用两个文具夹固定在支架竖板上。在槽内倒入已充分溶化的琼脂,冷凝后封闭胶腔底部。 ( 2 )用直径约 2mm 的聚乙烯管连接好梯度混合器、恒流泵、凝胶模。 ( 3 ) 30% 胶液的配制取 50ml 烧杯一只,加凝胶贮液① 14ml ,水 14ml,...
下面我们将介绍SDS-PAGE电泳试剂的配制方法。 聚丙烯酰胺凝胶电泳胶液配制 1. 将蒸馏水取2L,通过0.22μm的滤膜过滤3遍来除杂质,备用。 2. 将40%(w/v)丙烯酰胺10mL,在干燥器中烘干2小时,然后加入蒸馏水固定容积至50mL。将10%(w/v)N, N’-二甲基亚硫脲5mL加入均聚化溶液中,搅拌30分钟至完全溶解。 3. ...
SDS-PAGE自制胶操作规程 一:试剂准备 SDS-PAGE电泳所用溶液: 30 %聚丙烯酰胺溶液(100 mL) 丙稀酰胺(Arc)29.2g,N-N-甲叉双丙稀酰胺(Bis)0.8g,加入去离子水定容至100mL,过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存。将商品用的40 %聚丙烯酰胺溶液稀释到浓度为30 %,冰箱4℃保存。 分离胶缓冲液1.5mol/L Tris·HCl,pH8.8:...
4向玻璃板间灌制分离胶,立即覆一层重蒸水,大约20 min后胶即可聚合; 5按如下体积配制6%浓缩胶3.0 ml,混匀;ddH2O 1.0 mol/LTris-HClpH=6.8 30% Acr-Bis 2.0 ml 400 ul 600 ul 10% SDS 10% AP TEMED 36ul 24ul 4ul 6将上层重蒸水倾去,滤纸吸干,灌制浓缩胶,插入样品梳; 7装好电泳系统,加入电极...
SDS-PAGE配制方法 10%(W/V, g/ml)过硫酸铵(APs)的配制:(100 ml) 1. 称取10g过硫酸铵; 2. 加入100 ml的去离子水,将固体粉末彻底溶解; 3. 贮存于4℃。 注意:10%过硫酸铵最好现配现用,配好的溶液在4℃保存可使用2周左右,过期会失去催化效果。 5×Tris-Glycine电泳缓冲液的配制:(1 L) 1. 称...
一、SDS-PAGE 凝胶制备 1、玻璃板梳子的清洁 先用自来水浸泡5分钟,洗洁精清洗,注意厚玻璃板两侧沟槽容易残留胶,可以用尖锐的东西轻刮,然后用自来水冲洗干净泡沫,再用纯水冲洗即可,37度烘干或者吹风筒吹干,注意别用热风长时间近距离吹,厚玻璃板两侧的边条是用粘胶粘在一起的,高热会使粘胶融化,久而久之可能引起密闭...
以下是制作SDS-PAGE凝胶的基本配方和制胶步骤: 配方: 1. 1%丙烯酰胺(Acrylamide)溶液:将3.7g丙烯酰胺和60μl N,N'-亚甲基双丙烯酰胺溶解在0.5ml双蒸水中,搅拌均匀。 2. 2.5%BT(Bis-Tris)溶液:将0.1g BT和0.25ml TBE(三酸乙酸盐电泳缓冲液)混合均匀。 3. 10%过硫酸铵(AMS)溶液:将10μl AMS溶解在1...
SDS-PAGE凝胶制备属于实验室最常规的操作了,刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方,这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。 1. 分离胶(12%) 配制 所需试剂 所需体积 分离胶(12%) ...