• 解决方案：尽量在 25 分钟内插入梳子，避免长时间暴露。结语 通过详细了解SDS-PAGE凝胶的配制方法及常见问题的解决方案，实验者可以有效提高实验成功率，减少误操作，从而获得高质量的实验结果。一块优质的SDS-PAGE胶能打好蛋白质电泳的基础，从而跑出清晰好看的条带，获得优质的实验结果。欢迎在阿拉丁进行优质试...
以下是制作SDS-PAGE凝胶的基本配方和制胶步骤: 配方: 1. 1%丙烯酰胺(Acrylamide)溶液:将3.7g丙烯酰胺和60μl N,N'-亚甲基双丙烯酰胺溶解在0.5ml双蒸水中,搅拌均匀。 2. 2.5%BT(Bis-Tris)溶液:将0.1g BT和0.25ml TBE(三酸乙酸盐电泳缓冲液)混合均匀。 3. 10%过硫酸铵(AMS)溶液:将10μl AMS溶解在1...
② 将两块洗净的玻璃板之间加入Spacer,按照Bio-Rad Mini Ⅱ/Ⅲ说明书提示装好玻璃板; ③ 按如下体积配制10%分离胶8.0 ml,混匀:ddH2O 3.0 ml;1.0 mol/LTris-HCl pH=8.8 2.1 ml;30% Acr-Bis 2.8 ml;10% SDS 80 ul;10%AP 56 ul;TEMED 6 ul。 ④ 向玻璃板间灌制分离胶,立即覆一层重蒸水,大约2...
5×SDS-PAGE Loading Buffer的配制(方案二):(10 ml) (本方案摘自《蛋白质技术手册》汪家政、范明) 组分:Tris-HCl pH6.8(60 mM);SDS (2%);溴酚兰(0.1%);甘油(25%);β-巯基乙醇(14.4 mM) 配制过程: 1. 量取1M Tris-HCl (pH6.8) 0.6 ml;50%的甘油5 ml;10%的SDS溶液2 m l;1%的溴酚兰1 ml...
在这个过程中,需要使用一系列试剂来形成凝胶、还原并变性蛋白质样品、以及进行电泳。下面我们将介绍SDS-PAGE电泳试剂的配制方法。 聚丙烯酰胺凝胶电泳胶液配制 1. 将蒸馏水取2L,通过0.22μm的滤膜过滤3遍来除杂质,备用。 2. 将40%(w/v)丙烯酰胺10mL,在干燥器中烘干2小时,然后加入蒸馏水固定容积至50mL。将10%(...
SDS-PAGE凝胶制备属于实验室最常规的操作了,刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方,这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。 1. 分离胶(12%) 配制 所需试剂 所需体积 分离胶(12%) ...
5.配制凝胶,以下为常用的SDS-PAGE凝胶体系 分离胶: 12% 15% H2O 3.4 ml 2.4 ml 1.5 M Tris-HCl, pH 8.8 2.5ml 2.5 ml 10% (w/v) SDS 0.1 ml 0.1 ml 30 %聚丙烯酰胺溶液 4.0 ml 5.0 ml 10% (w/v) (APS) 0.05 ml 0.05 ml TEMED 0.005ml 0.005ml 浓缩胶(5%): H2O 2.8 ml 0.5 M Tris...
SDS-PAGE蛋白质电泳步骤 将收集的各样品加入等体积的2×SDS-PAGE Loading Buffer,煮沸裂解5min,冰浴2min,12,000rpm离心10min,取上清-20℃保存备用。 1)按照电泳装置的使用说明,装好洁净干燥的玻璃板。 2)分离胶的制备 按下列成分配制10mL 12%分离胶: ...
聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE凝胶)在生物学实验中被广泛应用,主要用来分离和鉴定不同分子量大小的蛋白质;应用最为普遍的方式是浓缩胶加上分离胶,前者起到将蛋白样品进行浓缩的作用,后者则是对蛋白质样品进行分离。 由于受到试剂来源、纯度以及配制方法等因素制约和影响,SDS-PAGE过程中常常出现意想不到问题,而短时间内又...