RT-qPCR技术具有高灵敏度、高特异性、广泛动态范围和准确性等优点,使其成为研究基因表达、病原体检测和药物研发等领域的重要工具。然而,该技术也存在一定的局限性,如成本较高、操作复杂和易受污染等。因此,在选择基因表达检测技术时需要根据实验目的和条件进行综合考虑。 RT-qPCR实验...
首先计算技术重复的平均值,一般采用算术平均数,(CT1+CT2+CT3)/3,如若重复性不好,可考虑增加样本量。在合适的情况下,技术重复的重复性不是很好时(如差值介于0.3~0.5),可考虑对技术重复采用几何平均数,\sqrt[3]{(CT1+CT2+CT3)}。 2、计算ΔCT(消去内参干扰) 获得各技术重复的均值后,简化表格,计算ΔCT(...
SYBR Green I 染料 与双链 DNA 结合,荧光信号强度与双链 DNA数量相关。 实验前准备 试剂与耗材: 特异性 PCR 引物 总RNA Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit LightCycler® 480 SYBR Green I Master 仪器: LightCycler® 480 实时定量 PCR 仪 96 或 384多孔板等 2.实验操作流程 反转录反应 Q-P...
实时荧光RT-PCR技术(RT-qPCR)利用荧光标记探针对扩增产物量进行实时跟踪,再根据扩增曲线计算出起始模板量,即样本病毒载量。下图是利用RT-qPCR进行新冠肺炎病毒(SARS-CoV-2)载量测定的主要过程。请据图回答: (1)过程①中,RNA提取裂解液可同时灭活病毒,原因是 。采集到的样本要迅速进行病毒灭活处理,其目的是 。RNA...
Real-time RT-PCR是qPCR和RT-PCR的组合,其中的“RT”是Reverse transcription(逆转录)的意思,所以RT-qPCR就是结合了荧光定量技术的逆转录PCR,即以mRNA或总RNA为模板,先反转录得到cDNA,再以cDNA为模板,通过荧光定量PCR进行定量检测分析。因为RT-PCR只可以定性,但不能进行定量分析。与RT-PCR一样,RT-qPCR定量分析...
RT-qPCR技术具有高灵敏度、高特异性、广泛动态范围和准确性等优点，使其成为研究基因表达和病毒检测等领域的重要工具。RT-qPCR技术的工作原理 1逆转录（RT）阶段 通过RT酶将RNA模板转录成相应的互补DNA（cDNA）。2实时荧光定量PCR（qPCR）阶段 在PCR反应过程中，结合荧光探针或DNA染料实时检测PCR产物的数量，并利用...
RT-qPCR的原理基于PCR技术,PCR是一种体外扩增DNA的方法,通过反复的循环使得DNA序列得以复制。RT-qPCR在PCR的基础上增加了实时监测功能,通过荧光信号实时监测PCR反应过程中的DNA合成量。在RT-qPCR中,首先需要将RNA模板转录成cDNA,然后利用DNA聚合酶进行扩增,同时监测PCR反应过程中的荧光信号,从而实时定量目标分子的数量。
RT-qPCR是一种结合了逆转录(RT)和聚合酶链式反应(PCR)的技术,能够在同一反应体系中完成RNA的逆转录和DNA的扩增。其原理主要包括以下几个步骤: 1. RNA逆转录,首先,RNA模板经过逆转录酶的作用,转录成相应的cDNA。逆转录过程中,逆转录酶利用RNA模板合成cDNA,同时RNA模板被降解,生成单链cDNA。 2. DNA扩增,接下来...
Real-time RT-PCR是qPCR和RT-PCR的组合,其中的“RT”是Reverse tranion(逆转录)的意思,所以RT-qPCR就是结合了荧光定量技术的逆转录PCR,即以mRNA或总RNA为模板,先反转录得到cDNA,再以cDNA为模板,通过荧光定量PCR进行定量检测分析。因为RT-PCR只可以定性,但不能进行定量分析。