RT-qPCR技术是一种广泛应用于分子生物学领域的技术，用于检测和定量分析RNA的表达水平。本文将介绍RT-qPCR技术的基本概念、工作原理、优点和应用范围，并探讨其在基因表达分析和病毒检测中的应用。与其他方法相比，RT-qPCR技术具有许多优点，但在应用中也有一些挑战和注意事项。RT-qPCR技术的基本概念 1什么是RT-qPCR...
RT-qPCR包括三大步骤:RNA的提取与质量检测、逆转录成cDNA、以及实时荧光定量PCR实验。通过RT-qPCR实验,可以合成cDNA探针、获取目的基因、以及分析基因的转录水平。 RNA的提取与质量检测 从细胞、组织等样本中提取出RNA后,需要对提取的RNA的纯度、浓度、以及完整性进行评估,质检达标后才能进...
总之,RT-qPCR是一种非常有用的分子生物学技术,可以用于研究基因表达、病毒检测、食品安全检测和药物筛选等领域。尽管存在一些局限性,但通过设计和实验优化可以克服这些问题。随着技术的不断发展,RT-qPCR将在未来发挥更广泛的作用。 文献阅读推荐 [1] "聚合酶链式反应 (PCR):原理、技术和应用",作者:Michael H. M....
real-time RT-PCR 中间的RT是 reverse transcription(逆转录),整个意思就是利用 mRNA 或总 RNA 为模板的实时逆转录 PCR 技术(quantitative Real-time RT-PCR)。real time RT-PCR 指的是 qPCR+RT-PCR 的组合,是说将 mRNA 逆转录为 cDNA 后再作为模板进行实时荧光 PCR 分析,因为 RT-PCR 是可以定性的,但不...
RT-QPCR 是 Q-PCR 的一种,应用广泛,包括: 扩增特异性分析 基因定量分析 基因分型 SNP 分析 常用方法: SYBR Green I 非特异性方法 Taqman 水解探针特异性方法 二、SYBR Green I 非特异性方法 SYBR Green I 染料 与双链 DNA 结合,荧光信号强度与双链 DNA数量相关。
RT-QPCR 基本原理和概念 实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过在PCR反应体系中加入荧光染料(SYBR Green)或荧光标记的特异性的探针,与DNA产物特异性结合,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可...
RT-qPCR实验技术方案基本概念 荧光定量逆转录PCR (quantitative reverse transcription PCR, RT-qPCR)是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实现了实时监测整个PCR进程，并对起始模板进行定量分析的方法。首先通过采集的样本来提取RNA，然后将提取的RNA通过逆转录酶合成互补DNA (cDNA)。随后，以cDNA为模板进行...
一、RT-qPCR是什么？实时荧光定量PCR（quantitative Real-time PCR）是一种在PCR反应体系中加入荧光基团，运用Taq酶的5′-3′外切酶活性和荧光能量传递技术，把核酸扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起，对整个PCR反应扩增过程进行了实时监测和连续地分析扩增相关的荧光信号，监测到的荧光信号随反应变化可以...