RT-qPCR包括三大步骤:RNA的提取与质量检测、逆转录成cDNA、以及实时荧光定量PCR实验。通过RT-qPCR实验,可以合成cDNA探针、获取目的基因、以及分析基因的转录水平。 RNA的提取与质量检测 从细胞、组织等样本中提取出RNA后,需要对提取的RNA的纯度、浓度、以及完整性进行评估,质检达标后才能进...
RT-qPCR技术是一种广泛应用于分子生物学领域的技术，用于检测和定量分析RNA的表达水平。本文将介绍RT-qPCR技术的基本概念、工作原理、优点和应用范围，并探讨其在基因表达分析和病毒检测中的应用。与其他方法相比，RT-qPCR技术具有许多优点，但在应用中也有一些挑战和注意事项。RT-qPCR技术的基本概念 1什么是RT-qPCR...
real-time RT-PCR 中间的RT是 reverse transcription(逆转录),整个意思就是利用 mRNA 或总 RNA 为模板的实时逆转录 PCR 技术(quantitative Real-time RT-PCR)。real time RT-PCR 指的是 qPCR+RT-PCR 的组合,是说将 mRNA 逆转录为 cDNA 后再作为模板进行实时荧光 PCR 分析,因为 RT-PCR 是可以定性的,但不...
qPCR:实时定量聚合酶链式反应(qPCR)是一种实时检测PCR过程中荧光信号变化的技术,可以定量检测目标分子的含量。qPCR通过在反应体系中加入荧光探针或荧光染料,在PCR过程中实时监测荧光信号的变化,从而计算出目标分子的拷贝数。qPCR技术主要用于DNA或cDNA的定量分析,如基因表达分析、病毒载量检测等。 RT-PCR:逆转录聚合酶链...
一、RT-qPCR是什么？实时荧光定量PCR（quantitative Real-time PCR）是一种在PCR反应体系中加入荧光基团，运用Taq酶的5′-3′外切酶活性和荧光能量传递技术，把核酸扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起，对整个PCR反应扩增过程进行了实时监测和连续地分析扩增相关的荧光信号，监测到的荧光信号随反应变化可以...
RT-QPCR 基本原理和概念 实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过在PCR反应体系中加入荧光染料(SYBR Green)或荧光标记的特异性的探针,与DNA产物特异性结合,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可...
RT-QPCR 是 Q-PCR 的一种,应用广泛,包括: 扩增特异性分析 基因定量分析 基因分型 SNP 分析 常用方法: SYBR Green I 非特异性方法 Taqman 水解探针特异性方法 二、SYBR Green I 非特异性方法 SYBR Green I 染料 与双链 DNA 结合,荧光信号强度与双链 DNA数量相关。
Real-time RT-PCR是qPCR和RT-PCR的组合，其中的“RT”是Reverse transcription（逆转录）的意思，所以RT-qPCR就是结合了荧光定量技术的逆转录PCR，即以mRNA或总RNA为模板，先反转录得到cDNA，再以cDNA为模板，通过荧光定量PCR进行定量检测分析。因为RT-PCR只可以定性，但不能进行定量分析。与RT-PCR一样，RT-qPCR...