RT-qPCR原理。 RT-qPCR是一种结合了逆转录(RT)和聚合酶链式反应(PCR)的技术,能够在同一反应体系中完成RNA的逆转录和DNA的扩增。其原理主要包括以下几个步骤: 1. RNA逆转录,首先,RNA模板经过逆转录酶的作用,转录成相应的cDNA。逆转录过程中,逆转录酶利用RNA模板合成cDNA,同时RNA模板被降解,生成单链cDNA。 2. ...
2)扩增曲线:将已知浓度的靶标稀释几个数量级后进行qPCR反应循环扩增,并用产生的荧光信号与相应浓度生成标准曲线。将未知样本的Ct值与该标准曲线进行比对,可以确定其浓度。 荧光阈值是PCR 3-15个循环荧光信号标准差的10倍(荧光阈值要设定在PCR扩增的指数期)。qPCR的扩增曲线与荧光阈值交点对应的横坐标就是循环数(Ct...
它基于PCR技术,通过测量PCR反应过程中的荧光信号来实时监测DNA或RNA的扩增过程,从而能够准确、快速地定量分析样品中目标基因的表达水平或拷贝数。本文将详细介绍RT-qPCR的原理及其在科研和临床中的应用。 RT-qPCR的原理主要包括RNA反转录、PCR扩增和荧光信号检测三个步骤。首先,RNA反转录将RNA转录为cDNA,即反转录过程...
其原理主要包括三个方面:逆转录、PCR扩增和实时荧光定量检测。 1. 逆转录 rt-qpcr实验首先需要将RNA转录为cDNA,这是通过逆转录酶(Reverse Transcriptase)催化的反应来实现的。逆转录酶可以将RNA模板转录成相应的cDNA,为后续的PCR扩增提供模板。 2. PCR扩增 在cDNA合成完成后,接下来是PCR扩增反应。PCR扩增需要引物(...
RT-qPCR的原理主要包括以下几个步骤,首先是RNA的逆转录(RT)反应,将RNA转录成cDNA;然后是PCR扩增反应,利用引物和荧光探针进行DNA的扩增和实时监测;最后是数据分析,根据荧光信号的变化,可以计算出目标分子的初始数量。 在RT-qPCR中,荧光信号的监测是实现定量的关键。通常采用SYBR Green或探针技术来监测PCR反应过程中的...
实时荧光定量 PCR (RT-qPCR) 是一种用于实时扩增和检测特定 DNA 或RNA 序列的分子生物学技术。该方法利用荧光染料或探针,当与扩增的 DNA 或RNA 分子结合时会发出信号,从而可以对目标序列进行量化。RT-qPCR 通常用于基因表达分析、病毒载量定量和基因突变检测等应用。 RT-qPCR原理的三个主要步骤: 1、反转录: 1...
RT-qPCR技术的工作原理 1逆转录（RT）阶段 通过RT酶将RNA模板转录成相应的互补DNA（cDNA）。2实时荧光定量PCR（qPCR）阶段 在PCR反应过程中，结合荧光探针或DNA染料实时检测PCR产物的数量，并利用定量标准曲线计算RNA的起始含量。RT-qPCR技术的优点和应用范围 高灵敏度 RT-qPCR技术可以检测极低水平的RNA，因此在研究...
【实验】激光扫描共聚焦显微镜的原理及操作方法、注意事项 13:46 【实验】流式细胞技术的原理及操作方法、注意事项 22:37 【实验】细胞破碎方法,超声破碎仪,高压均质机的原理,使用方法,注意事项,破碎率的测定 26:00 【实验】普通PCR、荧光定量RT-qPCR、数字PCR的基本原理和操作方法,注意事项 19:05 【实验...