反转录PCR（Reverse Transcription，RT-PCR）又称为逆转录PCR，是以组织或细胞中提取的总RNA中的mRNA作为模板，采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA的步骤。具体方法可参考汉恒生物反转录试剂盒说明书：HBScript cDNA反转录试剂盒。HBScript cDNA合成试剂盒包含gDNA Remover、配套buffer和HBScript cDNA Syn...
另外,使用dNTP对于有效合成cDNA也是特别重要的。迈迪安提供专门的RT-qPCR Buffer (MDX034),含有优化的离子和dNTP浓度,能够大大简化研发优化的时间。 04 gDNA去除 RNA中存在基因组DNA(gDNA)污染可能会引起qPCR反应中出现假阳性,导致结果的不准确,所以逆转录实验中...
①微量分光光度计检测RNA浓度。先用稀释用的TE buffer将分光光度计调零,然后取少量RNA溶液用TE稀释后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的OD值。OD260下读值为1表示40 ng RNA/ml,样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:OD260×稀释倍数×40 ng/ml。OD260/OD280的比值在1.8~2.0的范围内为佳。 ②变性琼脂糖凝胶电...
若不配制 Master Mix,向步骤 1 的反应液中添加试剂时,要先加入 RNase Free dH2O 和5×PrimeScript Buffer 2 (for Real Time)混合均匀,以使 gDNA Eraser 的活性充分受到抑制, 再添加 RT Primer Mix、PrimeScript RT Enzyme Mix I,轻轻混匀进行反转录反应。 使用RT Primer Mix 可以高效合成 cDNA。因为实验目的...
反转录获得的cDNA体系比较复杂(包含引物、dNTP、Buffer等多种成分),其中的部分成分在OD260处同样有吸光值,反转录后直接用产物测量无法获得准确的cDNA浓度。 对于高丰度基因,在定量时可将cDNA稀释4-10倍;低丰度基因不建议稀释。在不确定基因表达丰度的情况下,可将cDNA做梯度稀释,然后根据定量Ct值确定最佳稀释度。
Lyo-Ready 1-Step RT-qPCR Buffer, MDX052 Application: RT-qPCR Specimen Type: RNA Concentration: 2x High Concentration: No Wet: Liquid Glycerol-Free: Yes Lyo-Ready: Yes Air-Dryable: No Dryable: Lyo-Ready Sustainability: Lyophilizable Glycerol-free RT-qPCR reaction buf...
若不配制Master Mix,向步骤 1 的反应液中添加试剂时,要先加入 RNase Free dH2O 和5×PrimeScript Buffer 2 (for Real Time)混合均匀,以使 gDNA Eraser 的活性充分受到抑制, 再添加 RT Primer Mix、PrimeScript RT Enzyme Mix I,轻轻混匀进行反转录反应。
①微量分光光度计检测RNA浓度。先用稀释用的TE buffer将分光光度计调零,然后取少量RNA溶液用TE稀释后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的OD值。OD260下读值为1表示40 ng RNA/ml,样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:OD260×稀释倍数×40 ng/ml。OD260/OD280的比值在1.8~2.0的范围内为佳。
原因:①模板不纯;②Buffer不合适;③退火温度偏低;④酶量过多;⑤dNTPs、Mg2+ 浓度偏高。 对策:①纯化模板;②更换 Buffer 或 mix;③适当提高退火温度;④按浓度比例设置酶的添加量;⑤适当降低 dNTPs 和 Mg2+ 浓度;⑥减少反应循环次数。 问题5:...
C81P3 Lyo RT-qPCR Buffer 公司简介 企业简介 翌圣生物科技(上海)股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白质改造和酶进化技术为驱动,聚焦生命科学产业链上游核心原料,从事分子、蛋白和细胞三大品类生物试剂的研发、生产与销售的高新技术企业,通过打通分子酶、蛋白、抗体、核酸、...