数字 PCR(Digital PCR, dPCR) 是目前可用的另一种强大技术，在临床诊断中有着广泛的应用。其中，dPCR 方法用于液体活检中的癌症监测和器官移植排斥监测等应用，这两种方法都基于检测患者样本中低丰度的无细胞 DNA[13]。dPCR 技术的原理 (图 5) 涉及将具有制备的 PCR 溶液的样本分离成大量分区 (通常为纳升大小...
实时荧光定量反转录PCR(Real-time RT-PCR,RT-qPCR)是qPCR和RT-PCR的组合,所以RT-qPCR(也有人写成qRT-PCR)是结合了荧光定量技术的反转录PCR,即以mRNA或总RNA为模板,先反转录得到cDNA,再以cDNA为模板,通过荧光定量PCR进行定量检测分析(RT-PCR只可以定性,但不能进行定量分析)。 (DOI: 10.1063/5.0021270) 总的...
PCR是聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）的简称，是一种体外扩增特定DNA片段的分子生物学技术。PCR技术自问世以来，在生物科学领域、分子诊断领域、亲子鉴定、法医鉴定以及犯罪调查等方面发挥了巨大作用，是迄今为止最为重要的技术之一。经过演化和革新，PCR技术已经发展了三代：普通PCR技术、实时荧光定量PCR技术（...
图1 PCR的第一个循环[1]● RT-PCR(Reverse transcription PCR)：反转录PCR可以使用RNA作为模板，生成互补DNA(cDNA)。使用逆转录酶可生成cDNA的单链拷贝。这可以使用与RNA的PolyA尾部相结合的寡聚体(dT)引物，或使用随机六聚体（六至九个碱基长的引物，在RNA转录物的多个点上进行结合）来完成。一般来说，两种...
RT-PCR常用于以下场景: 1)病毒检测:RT-PCR被广泛应用于病毒的检测和诊断,如SARS、COVID-19等。 2)食品安全监测:用于检测食品中的致病菌和毒素的RNA,保障食品安全。 3)医学研究:用于检测和治疗疾病相关的基因表达和分子机制研究。 总之,RT-PCR是一种重要的分子生物学技术,广泛应用于基础研究、临床诊断、药物筛选...
一、什么是PCR? 二、PCR的原理 三、PCR的分类 1.普通 PCR 2.实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR) 3.数字PCR(Digital PCR, Dig-PCR, dPCR) 4. 逆转录PCR( Reverse T ranscription - PCR , RT - PCR) 5.实时荧光定量逆转录PCR(Real-time RT-PCR, RT-qPCR) 四、总结 五、资料自取...
(1)普通PCR技术 普通PCR即第一代PCR技术,以双链DNA为模板,以dNTP为底物进行扩增,特异性地扩增双链DNA的过程,然后采用琼脂糖凝胶电泳对产物进行定性分析。 PCR的过程大致可分为高温变性、低温退火、适温延伸三个基本反应步骤。 ① 高温变性:双链DNA模板经过高温(95℃左右)加热一定时间(10~30s)后,双螺旋的氢键断...
PCR——实验室必备实验,从基因鉴定到信号通路验证,几乎每周都要 P 个三五次,但是,有多少人能将 RT-PCR、qPCR、Real-time PCR、Real-time RT-PCR 区分开?有多少同学还在犯晕! 本文将从以下几个方面为大家详细…
2.实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR) 实时荧光定量PCR,也叫Real-Time PCR,即二代PCR,是指在PCR扩增反应体系中加入荧光染料或者荧光基团,在整个PCR过程中通过收集荧光信号实时监测每一个循环中扩增产物量的变化,最后通过标准曲线和CT值对待测样品进行定量分析。qPCR常用的有两种方法:SYBR Green法和...