最后总结:我觉得引物第一,模板第二,其他神马的只要按PCR的规则随便都可以做出来,做得好不好看而已,你有没有考虑过模板物种问题?是不是没混匀?机器问题?上样问题?试剂存放时间问题,我觉得做不出来要细心地找原因. 我也不是什么老手,尽我所能而已,祝你好运. 分析总结。 引物设计的问题我发现primer5和oligo7验证...
RT-PCR的电泳荧光条带分析 本实验是应用于RT- PCR的电泳荧光条带分析方面。本实验所要研究的核心问题是PCR的结果如何与已知基因的DNA相对比,由此找出PCR扩增子之间的差异和缺失的基因序列,最后确定基因突变类型、位点以及进一步研究其功能的可能性等。 在生物化学中,PCR的意思是聚合酶链式反应,也就是将DNA聚合酶加...
RT-PCR原理 微量移液器 台式微量离心机 电泳槽 凝胶成像系统 主要仪器 电泳仪 热循环仪 实验步骤 1 标记一个洁净的1.5mL反应管,向其中依次加入: RNA溶液 5 μL RT mix 15 μL 20 μL 2 盖紧管盖,轻轻混匀后,离心 30 s,使反应成份均匀富集于管底。 3 42 ℃水浴30 min 。 RT mix的成分:RNasin、...
本试剂采用稳定高效的RT-PCR预混体系,是以RNA为模板进行一步法RT-PCR的专用试剂。其原理为用基因特异性引物进行反转录反应,获得第一链cDNA(不可使用Oligo(dT)或Random Rimer合成第一链cDNA),再使用基因特异性正向引物和反向引物进行PCR扩增,在同一反应体系中一步完成从反转录到PCR的全部过程。反应体系中已含有电泳...
解析 检验一下产生的扩增后的片段的长度和浓度~要是片段长度为目的片段长度或者相差不多的话,就说明扩增成功了~有的时候扩增完电泳会发现片段长度与目的基因的差了好多,那就是有问题啦~而且有的时候还会出现多条带等等情况,就都是出问题的体现~应该查一查引物设计等等方面~...
3、微流体毛细管电泳系统(分析 RNA 浓度和完整性) 目前已经有成熟并广泛应用的生物分析仪,如 Agilent 2100、Experion™ 自动电泳工作站等。 此外还可以采用 3`:5` assay(检测提取产物中 GAPDH mRNA 的完整性来代表所有 RNA 的完整性,分析 RNA 完整性)、SPUD assay (分析 PCR 抑制剂)、NRT PCR assay(分析 ...
RT-PCR及琼脂糖凝胶电泳原理与技术 RT-PCR（reversetranscriptional-PCR）RT-PCR原理 mRNA 杂化双链DNA聚合酶 cDNA PCR扩增 RT-PCR主要用途 检测特异基因的表达量特异基因的组织定位构建cDNA文库鉴定已转录序列是否发生突变 RT-PCR反应体系 一步法RT-PCR 10×bufferMg2+dNTPRnaseInhibitorAMVRnaseXLAMV-TaqH2O引物Ⅰ...
1、小鼠肝脏组织总RNA的提取2、RNA的琼脂糖凝胶电泳3、以RNA为模板进行RT-PCR4、PCR产物的电泳及回收 实验一.提取小鼠肝脏组织的RNA 一、真核细胞的总RNA 1、mRNA:1-5%5`鸟嘌呤7位甲基化—CH3修饰。1）免受核酸酶破坏，2）起始、促进蛋白质合成。3`poly(A)尾巴结构20--200个A.翻译所必需。起始密码：AUG...
问个重组质粒的电泳图和重组质粒pcr产物的电泳图的基本问题 首先,重组后的质粒肯定比载体大,可以通过电泳一定的区分,通过这个对比的话最好是酶切过后的其次,因为你重组的片段是通过PCR扩增出来的,所以你重组要是成功了,那么就可以用相同的引物扩增出来,所以PCR做完了过后,电泳时会出现和目的条带一样大的条带,反之...
半定量RT-PCR参照的做法一般有两种：1) 将要比较的两个样品的BETA-ACTIN 调成一样的亮度，然后就可以直接比较目的基因的亮度了。方法的结果比较直观，但较费事。2) 不进行调平，一个样品里将目的基因和BETA-ACTIN直接比较，用软件就可以做到，然后将不同样品的这个比值进行比较就可以了。方法比较...