7.预变性5min足够了,循环中的变性以你的产物长度来说30s也够了,不过不放心可以改啊,条件是摸索出来的嘛. 最后总结:我觉得引物第一,模板第二,其他神马的只要按PCR的规则随便都可以做出来,做得好不好看而已,你有没有考虑过模板物种问题?是不是没混匀?机器问题?上样问题?试剂存放时间问题,我觉得做不出来要细心...
造成电泳没有条带的原因是多种多样的,1、mRNA提取是不是成功,有没有降解,(可以稍微取一点跑个电泳或测OD值)2、反转录产生cDNA是不是成功的,就是引物的设计是不是合适3、PCR扩增是的温度是不是合适的 结果二 题目 pcr 电泳图 什么都没有 我做的是RT-PCR,跑试剂盒的阳平对照之后,电泳图上什么也没有,不知...
最近2个月反复做PCR跑电泳一直都是只有引物二聚体没有目的条带,我的PCR条件是这样的模板1ul (浓度100ng)引物上下游各1ul (浓度10uM/L)pcr mix 10ul (用过biotek的mix,也用过takara 的EX Taq HS)rnafree水 7ul 94℃ 5min94℃ 30s55-60℃ 30s...
cDNA作为互补DNA,就是以mRNA为模板通过RT-PCR合成得到的.所以,PCR产物在核酸电泳EB染色之后应该显示cDNA条带才对.你若问什么没得到这样的条带,那么很可能是你引物设计的问题,或者是模板RNA提取的问题,又或者是RT-PCR反应体系与程序的问题……可能的话,再补充一次?
问个重组质粒的电泳图和重组质粒pcr产物的电泳图的基本问题 首先,重组后的质粒肯定比载体大,可以通过电泳一定的区分,通过这个对比的话最好是酶切过后的其次,因为你重组的片段是通过PCR扩增出来的,所以你重组要是成功了,那么就可以用相同的引物扩增出来,所以PCR做完了过后,电泳时会出现和目的条带一样大的条带,反之...
原因很多,可能是提取过程中,RNA降解了,也可能是你的反转录不成功,扩不出来;也有可能是你的循环数太少了
建议先找一个表达丰度高的体系，验证一下你的引物是否工作。对于极低表达丰度的目标，一轮PCR很有可能得不到产物，这是建议使用NESTED PCR，就是设计2套嵌套的引物，第一轮先用外面的那对，理论上可以得到一个比较大的产物（跑胶不一定能看到），然后稀释PCR产物50倍，再用里面那对引物扩一次，一般...
cDNA作为互补DNA,就是以mRNA为模板通过RT-PCR合成得到的.所以,PCR产物在核酸电泳EB染色之后应该显示cDNA条带才对.你若问什么没得到这样的条带,那么很可能是你引物设计的问题,或者是模板RNA提取的问题,又或者是RT-PCR反应体系与程序的问题……可能的话,再补充一次? 解析看不懂?免费查看同类题视频解析查看解答 更多...
👉1无扩增产物 可能原因1:引物问题(包括:引物设计较差,引物合成较差,引物浓度太低)。 解决方法:设计引物的时候,避免在引物3'端含有互补序列;避免可以形成内部发卡结构的序列;设计Tm类似的引物。针对引物合成的问题,用普通电泳法,看引物的设计和合成质量,是否有目的条带出现。最佳引物浓度介于0.1μM到0.5μM之间。
各个成分的量有无确定标准,这可以改变也可以不改变,根据实验所需条件,如果说明书里的条件能跑出来,那没必要改变;跑不出来,我们可以思考一些是不是模板、引物的量是否正确。在考虑调整退火温度。 Q3:PCR结果跑电泳,actin有,但跑不出目的条带,有几种原因?与cDNA的量少有关吗?Mg离子太多是否会抑制Taqase的活性?