（1）电泳检测：1×TAE缓冲液，5-7/cm电压下，电泳30min，紫外灯下观察，拍照。（2）结果分析：用Gel-Pro软件分别对3次重复的PCR结果进行数量化统计，取其平均值作为该基因在某一时期的表达量。利用Excel软件，以不同时期不同基因的表达量与内参基因（EF）表达量的比值（相对表达量，relative expression）作横...
图1 PCR产物检测的琼脂糖凝胶电泳 观察结果: ① 是否有扩增产物。 ②如有拖尾或有几条区带,说明有非特异性扩增。 ③分子量标准电泳后区带是否分开。 ④与分子量标准比较,PCR产物的长度是否正确。 ⑤PCR产物的产量。 ⑥引物二聚体。 RT-PCR检测人β-actin基因表达 扩增产物长度 260 bp 问题及解决方法 无...
RT-PCR的电泳荧光条带分析 本实验是应用于RT- PCR的电泳荧光条带分析方面。本实验所要研究的核心问题是PCR的结果如何与已知基因的DNA相对比,由此找出PCR扩增子之间的差异和缺失的基因序列,最后确定基因突变类型、位点以及进一步研究其功能的可能性等。 在生物化学中,PCR的意思是聚合酶链式反应,也就是将DNA聚合酶加...
一步法RT-PCR 10×bufferMg2+dNTPRnaseInhibitorAMVRnaseXLAMV-TaqH2O引物Ⅰ引物Ⅱ2ul4ul2ul0.4ul0.4ul0.4ul3.8ul1ul1ul RNA(≤1ug)5ul 两步法RT-PCR ComponentsRNA5xR.T.bufferdNTPs(10mmol/L)PrimerRnasin(50U/µl)AMV-RT((10U/µl)RT-PCR反应体系 Volume(µl)8(1µg)4210.41.0...
1)RT-PCR(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction):中文名称叫逆转录PCR或反转录PCR,是指将RNA反转录成cDNA, 然后使用PCR技术对cDNA进行扩增检测的技术。普通RT-PCR适用于样本数量较少的情况,但需要后续的凝胶电泳和DNA序列分析。 2)RT-qPCR((R...
半定量RT-PCR参照的做法一般有两种：1) 将要比较的两个样品的BETA-ACTIN 调成一样的亮度，然后就可以直接比较目的基因的亮度了。方法的结果比较直观，但较费事。2) 不进行调平，一个样品里将目的基因和BETA-ACTIN直接比较，用软件就可以做到，然后将不同样品的这个比值进行比较就可以了。方法比较...
人类细胞质、RT-PCR的原理、方法、琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用 分离提纯RNA的目的 分析不同发育时期基因的表达状况获得新基因研究基因的拼接分析相应的蛋白产物 RNA提取的原理 在哺乳动物中，rRNA占总量的80%-85%，tRNA和核内小分子RNA占10-15%，而mRNA只占1-5%。rRNA由28S、18S、5S等几类组成，这些...
1. RT-PCR结果分析 我们首先进行了RNA提取和逆转录反应,得到了各组织或条件下的cDNA样本。然后,我们设计了特异性引物,进行了PCR扩增。最后,通过琼脂糖凝胶电泳,观察到了PCR产物的带型。 根据PCR产物的带型,我们可以初步判断目标基因在不同组织或条件下的表达水平。比如,在组织A中,我们观察到了明显的PCR产物带,说...
主要内容 ◆人类细胞质RNA提取◆RT-PCR的原理、方法◆琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用 2018/11/27 人类细胞质RNA提取 提取总RNA 电泳 合成cDNA第一链 2018/11/27 PCR 真核细胞RNA的种类 真核细胞总RNA主要由rRNA（80-85%）、tRNA和核内小分子RNA(10-15%)、mRNA（15%）组成，其中rRNA、tRNA和mRNA位于细胞质...