1RT-PCR产物电泳结果只有引物二聚体,没有目的条带,更换引物了也这样,最近2个月反复做PCR跑电泳一直都是只有引物二聚体没有目的条带,我的PCR条件是这样的模板1ul (浓度100ng)引物上下游各1ul (浓度10uM/L)pcr mix 10ul (用过biotek的mix,也用过takara 的EX Taq HS)rnafree水 7ul 94℃ 5min94℃ 30...
1、首先从样本入手:先应得定量样本,严格的rt是要求反应的rna量是一致的,这样通过判断内参的表达一致与否判断结果的可信性。最佳上样量1-2ugRNA,每管。 2、从反应条件讲,必须保证反应发生在pcr指数扩增区,可以配成一个50ul的反应体系,每跑5-10循环取出10ul跑电泳,直到达到产量饱和,找到最佳循环数。 3、选好内参。
PCRmix的成分:PCR反应缓冲液、2.5mMdNTPs、TaqDNA聚合酶实验步骤(6)在PCR仪上设置反应循环参数:本次实验为:9420s℃,5620s℃,7220℃s,循环数为26,最后于72℃充分延伸5min后,终止反应。(7)置反应管于PCR仪上进行热循环。(8)反应完毕后,取5LμPCR产物,于1.5%琼脂糖凝胶电泳检测结果。注意事项1.2.3.4.PCRPCR...
(1)电泳检测:1×TAE缓冲液,5-7/cm电压下,电泳30min,紫外灯下观察,拍照。(2)结果分析:用Gel-Pro软件分别对3次重复的PCR结果进行数量化统计,取其平均值作为该基因在某一时期的表达量。利用Excel软件,以不同时期不同基因的表达量与内参基因(EF)表达量的比值(相对表达量,relative expression)作横...
RT-PCR的电泳荧光条带分析 本实验是应用于RT- PCR的电泳荧光条带分析方面。本实验所要研究的核心问题是PCR的结果如何与已知基因的DNA相对比,由此找出PCR扩增子之间的差异和缺失的基因序列,最后确定基因突变类型、位点以及进一步研究其功能的可能性等。 在生物化学中,PCR的意思是聚合酶链式反应,也就是将DNA聚合酶加...
人类细胞质rna提取rtpcr的原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用分析课件目录引言人类细胞质RNA提取RT-PCR技术琼脂糖凝胶电泳结果分析应用分析结论01引言细胞质RNA在生物学和医学研究中的重要性细胞质RNA在细胞功能和疾病发生中发挥重要作用,对细胞质RNA的研究有助于深入了解生命过程和疾病机制。现有提取方法的局限性和挑...
1人类细胞质、RT-PCR的原理、方法、琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用2分离提纯分离提纯RNARNA的目的的目的分析不同发育时期基因的表达状况获得新基因研究基因的拼接分析相应的蛋白产物3 在哺乳动物中,rRNA占总量的80%-85%,tRNA和核内小分子RNA占10-15%,而mRNA只占1-5%。 rRNA由28S、18S、5S等几类组成,这些RNA分...
PCR扩增一步法一步法ComponentsVolume(l)RNA8(1g)5xR.T.buffer4dNTPs(10mmol/L)2Primer1Rnasin(50U/l)0.4AMV-RT(10U/l)1.0DEPC-H2O3.6Total20两步法两步法ComponentsVolume(lR.T.Product5.010 xPCR buffer2.5MgCl2(25mmol/L)2.5Primer11Primer21Taq DNA polymerase1ddH2O12Total25cDNA PCR扩增扩增 cDNA第一...
可能存在大小相近的非特异性产物,建议进行高分辨率琼脂糖电泳确认。 3.熔解曲线单峰但Tm值在80℃以前 推测未加模板,仅有引物二聚体的扩增。进行高分辨率琼脂糖电泳确认产物或重复实验。 4.熔解曲线峰型杂乱 1)反应体系污染,结合NTC和...