图2 RNA Pull-down实验流程图（Panda et al., 2016）。RNA Pull-down技术实验流程主要包括以下几个步骤：（1）构建含目的基因序列质粒：选择自己感兴趣的基因，根据其序列用同源重组方式或全基因合成构建含目的基因序列质粒；并测序验证序列准确性，并提取含目的基因序列质粒备用；（2）转录模板的获取：T7 RNA聚合...
在摇床上室温摇动10 min，摇动速度为60-70 rpm。水洗涤：弃银染终止液，加入100 ml Milli-Q级纯水或双蒸水，在摇床上室温摇动2-5 min，摇动速度为60-70 rpm。保存：可在Milli-Q级纯水或双蒸水中保存。或采用适当的方式制备成干胶。十、实验结果 10.1 WB预实验验证抗体质量（WB项目-质控1）例如：结果说明...
5、向吸附柱中加入600μl漂洗液PW,12,000rpm离心1min,倒掉废液,将吸附柱CB2放入收集管中。 6、重复操作步骤5 7、将吸附柱CB2放入收集管中,12,000rpm离心2min,将吸附柱置于室温,放置3min。 8、将吸附柱CB2放入一个新的离心管中,向吸附膜中间位置滴加20μl 洗脱水(于55℃预热过),室温放置2min,12,000rpm离...
RNA pull down:RNA沉淀检测,是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验方法之一。使用体外转录将RNA进行生物素标记,并与细胞蛋白裂解液孵育,形成RNA-蛋白复合物。复合物通过磁珠结合后分离,复合物纯化洗脱后通过Western blot验证检测特性的蛋白。若筛选可能结合的蛋白通过质谱实验进行检测筛选。 实验流程: 2.1生物...
rna pull down 质谱步骤rna pull down RNA pull down实验是一种用于研究RNA与蛋白质相互作用的技术,其步骤通常包括以下几个阶段: 1.构建RNA过表达质粒:需要通过基因合成并经过测序验证来构建RNA过表达质粒。 2.体外转录模板准备:设计含有T7启动子的引物,通过PCR扩增得到转录模板。 3.体外转录:以PCR产物为模板,...
RNA pull down实验的大致流程：1、探针制备 设计并合成含有T7启动子的特异性引物。使用含有目的基因的质粒作为模板进行PCR扩增。利用PCR产物作为模板进行体外转录，获得目的RNA。对目的RNA进行标记，通常使用生物素标记。2、细胞裂解液准备 收集细胞并裂解，制备细胞裂解液。通过离心去除细胞碎片，收集上清液。3、RNA-蛋白...
以下是RNA Pull Down实验的基本流程: 1. 样品准备:首先,我们需要一个含有目标RNA的细胞或组织样本。这个样本可以通过常规的细胞培养或组织裂解方法获取。同时,为了防止RNA降解,所有操作过程需要在RNA酶抑制剂的存在下进行。 2. 生物素标记:目标RNA通常会被生物素标记。这可以通过化学修饰或利用生物素依赖的转录系统来...
RNA pull-down实验是检测与目的RNA结合的蛋白质。使用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通过western blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与RNA相互作用。
详细实验操作步骤:探针法RNA pull-down,这样做!, 视频播放量 3317、弹幕量 1、点赞数 70、投硬币枚数 11、收藏人数 206、转发人数 28, 视频作者 金开瑞生物, 作者简介 实验问题咨询及生物类合作咨询:13343461158; 蛋白抗体、检测分析/分子互作、基因/引物合成各生物领
上次Andy介绍到RNA pull-down的原理和做该实验的准备工作,在万事俱备以后,就可以开始为期三天的正式实验了。我们这次的实验流程是采用的生物素标记的磁珠法,也是比较常规的一种方法~ RNA pull-down assay using Streptavidin magnetic beads 1 RNA pull-down...