RIP、RNA pull-down和MeRIP等实验技术是我们深入研究RNA和蛋白质相互作用的关键工具。RIP用于选择性地富集与特定RNA相互作用的蛋白质,RNA pull-down通过RNA探针捕获相互作用蛋白质,而MeRIP则用于甲基化RNA的研究。下面就让我们详细了解一下—— RIP RIP,全称为RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay,RNA 结合蛋白...
采用链霉亲和素磁珠(PuriMag G-strep 货号PMG015)进行RNA pull-down RNA pull-down assay using Streptavidin magnetic beads 1.RNA pull-down 第一天——生物素探针标记RNA 1)前期准备:取出Pierce™ RNA 3' End Desthiobiotinylation Kit,将试剂盒中的PEG及DMSO置于常温,其余组分置于冰上融化,也可将PEG放于37...
GST pull down(GST融合蛋白沉降技术)是体外检测蛋白相互作用的常用方法,一般来说,GST融合蛋白pull down方法用于两个方面:一是鉴定能与已知融合蛋白相互作用的未知蛋白质;二是鉴定两个已知蛋白质之间是否存在相互作用。为排除假阳性所设的一组对照实验是在没有诱饵蛋白存在的条件下,将样品结合到GST上。该对照可以是表...
RNA pull-down assay using Streptavidin magnetic beads 1 RNA pull-down 第一天——生物素探针标记RNA 1.前期准备:取出Pierce™ RNA 3' End Desthiobiotinylation Kit,将试剂盒中的PEG及DMSO置于常温,其余组分置于冰上融化,也可将PEG放于37摄氏度融化;打开PCR仪; 2.依照RNA母管含量,用DEPC水溶解RNA,我们通常...
上次Andy介绍到RNA pull-down的原理和做该实验的准备工作,在万事俱备以后,就可以开始为期三天的正式实验了。我们这次的实验流程是采用的生物素标记的磁珠法,也是比较常规的一种方法~ RNA pull-down assay using Streptavidin magnetic beads 1 RNA pull-down...
Pull Down Assay GST Pull Down Pull down技术的基本原理是 将一种蛋白质固定于某种基质上(如Sepharose),但细胞抽提液经过该基质时,可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附,而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。 被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或洗脱条件而回收下来。通过pull down技术可以确定已知的蛋白与钓...
RNA pull-down assay Long Noncoding RNA as Modular Scaffold of Histone Modification Complexes Miao-Chih Tsai, et al.RNA pull-down assay using nuclear extract 1. Biotin-labeled RNAs were in vitro transcribed with the Biotin RNA Labeling Mix (Roche) and T7 RNA polymerase (Promega), treated with...
RNA pull-down assay Long Noncoding RNA as Modular Scaffold of Histone Modification Complexes Miao-Chih Tsai, et al.RNA pull-down assay using nuclear extract 1. Biotin-labeled RNAs were in vitro transcribed with the Biotin RNA Labeling Mix (Roche) and T7 RNA polymerase (Promega), treated with...
1. RNA Pull Down Assay(1) 为了鉴定特定的RNA分子是否与某一种特定的蛋白结合,研究人员根据DNA-Protein实验中DNA Pull down的实验方法进行改进,使其在RNA上实现。 技术步骤如下: (1)设计末端携带T7 RNA Promoter的引物扩增DNA片段; (2)利用T7 RNA polymerase 进行转录,转录过程添加携带生物素的dNTP,使转录本...
RNApull-downassayLongNoncodingRNAasModularScaffoldofHistoneModificationComplexesMiao-ChihTsai,etal.RNApull-downassayusingnuclearextract1.Biotin-labe..