Pull down技术的基本原理是将一种蛋白质固定于某种基质上(如Sepharose),但细胞抽提液经过该基质时,可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附,而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或洗脱条件而回收下来。通过pull down技术可以确定已知的蛋白与钓出蛋白或已纯化的相关蛋白间的相互作用...
除RIP和RNA pull Down以外，凝胶迁移或电泳迁移率检测(Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA)，也称为凝胶阻滞实验或DNA结合实验，是一种广泛应用于分子生物学的研究技术，也可以用于研究蛋白质（尤其是转录因子）与DNA或RNA之间的相互作用。基本原理 EMSA的基本原理是利用凝胶电泳技术来观察蛋白质与DNA或RNA形成...
ChIP、RIP、RNA pull-down、EMSA、Luciferase原理1 ChIP实验 通过与染色质片段共沉淀和PCR技术,在体内检测与特异蛋白质结合的DNA片段。将处于适当生长时期的活细胞用甲醛交联后将细胞裂解, 染色体分离并打碎为一定大小的片段200bp-1000bp;然后用特异性抗体免疫沉淀目标蛋白与 DNA交联的复合物, 对特定靶蛋白与DNA片段...
Pull Down Assay GST Pull Down Pull down技术的基本原理是 将⼀种蛋⽩质固定于某种基质上(如Sepharose),但细胞抽提液经过该基质时,可与该 固定蛋⽩相互作⽤的配体蛋⽩被吸附,⽽没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。 被吸附的蛋⽩可以通过改变洗脱液或洗脱条件⽽回收下来。通过pull down技术可以确...
ChIP、RIP、RNA-pull-down、EMSA、Luciferase原理 1 ChIP实验 通过与染色质片段共沉淀和PCR技术,在体内检测与特异蛋白质结合的DNA片段。将处于适当生长时期的活细胞用甲醛交联后将细胞裂解, 染色体分离并打碎为一定大小的片段200bp-1000bp;然后用特异性抗体免疫沉淀目标蛋白与 DNA交联的复合物, 对特定靶蛋白与DNA片段...
上次Andy介绍到RNA pull-down的原理和做该实验的准备工作,在万事俱备以后,就可以开始为期三天的正式实验了。我们这次的实验流程是采用的生物素标记的磁珠法,也是比较常规的一种方法~ RNA pull-down assay using Streptavidin magnetic beads 1 RNA pull-down 第一天——生物素探针标记RNA ...
图1.RNA Pull Down 示意图 2. REMSA(RNA Electrophoretic Mobility Shift Assay, REMSA) 电泳迁移率检测是一种用来研究蛋白与其结合的DNA或RNA互作的技术,其原理是蛋白结合了核酸后其分子质量变大,相对于free probe而言,核酸-蛋白复合物在聚丙烯酰胺凝胶上迁移变慢,通过检测迁移率可以鉴定核酸是否与蛋白结合。
使用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物,该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通过WB或MS来检测。 实验操作视频链接:https://www.jove.com/video/57786/biotin-based-pulldown-assay-to-validate-mrna-targets-cellular...
②蛋白质-RNA:如RIP、RNA pull down ③蛋白质-DNA:如染色质免疫共沉淀技术(ChIP) ④蛋白质-DNA/RNA:如凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA) ⑤RNA-DNA:如荧光素酶实验(Luciferase Assay) 一、蛋白质-蛋白质 1.免疫沉淀(IP) 免疫沉淀IP 是利用抗体特异性反应富集纯化目的蛋白的一种方法,可用于目的蛋白的定性和定...