Pull Down Assay 一、GST Pull Down Pull down技术的基本原理是将一种蛋白质固定于某种基质上(如Sepharose),但细胞抽提液经过该基质时,可与该固定蛋白相互作用的配体蛋白被吸附,而没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。被吸附的蛋白可以通过改变洗脱液或洗脱条件而回收下来。通过pull down技术可以确定已知的蛋白与钓...
除RIP和RNA pull Down以外，凝胶迁移或电泳迁移率检测(Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA)，也称为凝胶阻滞实验或DNA结合实验，是一种广泛应用于分子生物学的研究技术，也可以用于研究蛋白质（尤其是转录因子）与DNA或RNA之间的相互作用。基本原理 EMSA的基本原理是利用凝胶电泳技术来观察蛋白质与DNA或RNA形成...
Pull Down Assay GST Pull Down Pull down技术的基本原理是 将⼀种蛋⽩质固定于某种基质上(如Sepharose),但细胞抽提液经过该基质时,可与该 固定蛋⽩相互作⽤的配体蛋⽩被吸附,⽽没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。 被吸附的蛋⽩可以通过改变洗脱液或洗脱条件⽽回收下来。通过pull down技术可以确...
ChIP、RIP、RNA-pull-down、EMSA、Luciferase原理 1 ChIP实验 通过与染色质片段共沉淀和PCR技术,在体内检测与特异蛋白质结合的DNA片段。将处于适当生长时期的活细胞用甲醛交联后将细胞裂解, 染色体分离并打碎为一定大小的片段200bp-1000bp;然后用特异性抗体免疫沉淀目标蛋白与 DNA交联的复合物, 对特定靶蛋白与DNA片段...
图1.RNA Pull Down 示意图 2. REMSA(RNA Electrophoretic Mobility Shift Assay, REMSA) 电泳迁移率检测是一种用来研究蛋白与其结合的DNA或RNA互作的技术,其原理是蛋白结合了核酸后其分子质量变大,相对于free probe而言,核酸-蛋白复合物在聚丙烯酰胺凝胶上迁移变慢,通过检测迁移率可以鉴定核酸是否与蛋白结合。
实验原理及步骤 RNA Pull-down:通过体外转录RNA并用生物素进行标记,然后与胞浆蛋白混合物共同孵育形成RNA蛋白质复合物,然后用链霉亲和素标记的磁珠分离纯化该复合物(利用生物素与链霉亲和素的非共价亲和作用)。洗脱后进行检测,如果检测蛋白为已知蛋白可通过WB进行鉴定,如果检测未知蛋白则可以结合质谱进行鉴定。流程为提...
使用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物,该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通过WB或MS来检测。 实验操作视频链接:https://www.jove.com/video/57786/biotin-based-pulldown-assay-to-validate-mrna-targets-cellular...
上次Andy介绍到RNA pull-down的原理和做该实验的准备工作,在万事俱备以后,就可以开始为期三天的正式实验了。我们这次的实验流程是采用的生物素标记的磁珠法,也是比较常规的一种方法~ RNA pull-down assay using Streptavidin magnetic beads 1 RNA pull-down...
RNApull-downassayusingnuclearextract 1.Biotin-labeledRNAswereinvitrotranscribedwiththeBiotinRNALabelingMix (Roche)andT7RNApolymerase(Promega),treatedwithRNase-freeDNaseI (Promega)andpurifiedwithRNeasyMiniKit(QIAGEN). 2.Biotin-HRPNorthernblotwasfollowedbymanufacture’smanual(NorthernMaxkit, Ambion)todemonstrate...