案例一题目：The STAT3-Binding Long Noncoding RNA lnc-DC Controls Human Dendritic Cell Differentiation小结：RNA pull-down设置实验组及反义链对照组，银染找出差异条带进行胶条质谱鉴定，分析结果筛选得到STAT3蛋白，进一步通过RIP-qPCR反向验证，证实STAT3蛋白可以与lnc-DC结合。Lnc-DC pull-down 银染检测及RIP验证...
B:根据银染结果来选择质谱鉴定的方式:RNA pull-down设置实验组及反义链对照组,银染找出差异条带进行胶条质谱鉴定。 1.存在肉眼可见差异条带 2.无肉眼可见差异条带 3.存在浓度差异条带 注:1:切取sense实验组泳道中的差异条带进行胶条鉴定。2:将sense实验组和antisense对照组两组蛋白液进行全谱鉴定,根据鉴定分析...
(1) Input:样本裂解液(总蛋白); (2) Antisense:目标 RNA 反义链探针的 pull-down 产物(对照组); (3) Sense:目标 RNA 正义链探针的 pull-down 产物(实验组). 待测蛋白的 RNA pull-down WB 检测图 广州辉骏生物科技股份有限公司 5 www.fitgene.com, Tel: 400-699-1663 ...
2.2 pull down (1)用600μL加入RNase抑制剂的裂解液分别裂解对照组和实验组细胞,并用细胞破碎器破碎细胞,冰上裂解15min,4℃、12000rpm离心20min,弃沉淀,保留上清;其中,对照组即转染空载体FII质粒的HEK 293T细胞,实验组为转染FII-AK159072RNA的pcDNA3.1质粒的HEK 293T细胞; (2)将步骤2.1中的配体磁珠均分为两...
⼀⽂掌握pulldown实验:RNApulldown,DNApulldown,Protei。。。 Pull Down Assay GST Pull Down Pull down技术的基本原理是 将⼀种蛋⽩质固定于某种基质上(如Sepharose),但细胞抽提液经过该基质时,可与该 固定蛋⽩相互作⽤的配体蛋⽩被吸附,⽽没有被吸附的“杂质”则随洗脱液流出。 被吸附的蛋⽩...
反过来,将pla2g163'-utr区分为两部分,利用针对这两部分的探针进行rna-pull-down实验,结果如表6和图44所示,表明是pla2g16的3'-utr-1区而非3'-utr-2可以与lncropm特异性结合。表6pla2g163'-utrrna-pull-down实验情况本发明实施例还进行荧光素酶报告基因实验,结果如图45所示,证明了敲低lncropm后会显着降低...
blot实验检测待定的rbps是否与靶rna结合;通过lc ‑ ms/ms实验,筛选并鉴定与靶rna结合的蛋白。 4.然而,目前rna pulldown研究的探针主要是生物素标记的单链探针,该方法存在分离到的蛋白假阳性率过高,rna探针结合蛋白的亲和力不够等较为明显的缺点。 技术实现要素: ...
RNA pull-down试验和western blot验证PiHL与多梳抑制复合物作用的结果如图8所示,RNA PiHL可以与EZH2蛋白结合,且PiHL的反义链几乎不能与EZH2蛋白结合。此外,western blot检测PiHL过表达和干扰后EZH2的表达变化,结果显示在DLD1和HCT116细胞中,PiHL表达水平的改变并不直接影响EZH2蛋白的表达水平(图9)。为了进一步鉴定...
另结合rna pull down和质谱检测等,证实了circclth是一个细胞质内主要表达的circrna,且circclth可能通过结合plec蛋白调控水牛骨骼肌细胞的增殖或分化。 15.因此,本发明申请保护所述环状rna circclth在促进骨骼肌细胞增殖或分化中的应用,所述circclth的核苷酸序列如seq id no.1所示。
9.RNA捕获实验(RNApull down) 使用RNApull down试剂盒,冰上操作: (1)探针设计:针对目标RNA(HAS2)设计阳性探针,同时使用反向互补序列作为阴性探针。根据序列合成相应探针并作生物素标记。 (2)组织样品使用RNAfree的PBS清洗两次,加入组织裂解液匀浆裂解。14000rpm,离心15min,取上清备用。