图2 RNA Pull-down实验流程图（Panda et al., 2016）。RNA Pull-down技术实验流程主要包括以下几个步骤：（1）构建含目的基因序列质粒：选择自己感兴趣的基因，根据其序列用同源重组方式或全基因合成构建含目的基因序列质粒；并测序验证序列准确性，并提取含目的基因序列质粒备用；（2）转录模板的获取：T7 RNA聚合...
RNA pull down操作步骤 流程 1:制备探针 2:蛋白+探针+磁珠孵育 3:洗脱 4:跑胶银染质谱/WB RNA pull down技术流程图 一:探针制备: 1实验方法 1.1 PCR扩增目的片段 在200ul PCR管中,以含目的基因的质粒作为模板进行PCR扩增。扩增反应体系如下表所示。PCR反应条件为94℃预变性2min,循环参数分别为94℃ 15s,55℃...
图1 RNA Pulldown实验流程图 另外,如果通过RNA Pulldown实验筛选得到了与靶RNA结合的蛋白,需要反向验证该蛋白是否可以将靶RNA拉下来,可以通过RNA免疫沉淀(RIP)实验进行验证,正反向同时验证,可以充分说明RNA与蛋白的结合关系。 吉玛基因提供经验丰富的RNA Pulldown实验和RIP实验服务项目,为初入实验室的您,解决实验操作...
>RNA pull-down结合质谱鉴定技术首次发现了LAMP5-AS1的潜在结合蛋白—DOT1L(一种H3K79甲基转移酶) >RIP qPCR实验确定了LAMP5-AS1与DOT1L结合 >截短型 RNA pull-down实验进一步明确了与LAMP5-AS1结合的DOT1L结构域 >体外酶活实验表明LAMP5-AS1与DOT1L的结合促进了DOT1L的甲基转移酶活性 >RNA干扰结合ChIP实验表...
③制备目的蛋白：诱导目的蛋白表达并提取目的蛋白；④GST-pull down实验；⑤Western Blot检测目的蛋白；⑥...
RNA pull-down实验是检测与目的RNA结合的蛋白质。使用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通过western blot实验检测特定的RNA结合蛋白是否与RNA相互作用。
复合物洗脱后,通过荧光定量PCR(RNA pull down-QPCR)或高通量测序(RNA pull down-seq)方法来鉴定目标RNN是否与某些RNA分子相互作用,通过Western blot(pull down-WB)实验和质谱(pull down-MS)技术检测目标RNA是否与某些蛋白相互作用。 二、实验流程图
复合物洗脱后,通过荧光定量PCR(RNA pull down-QPCR)或高通量测序(RNA pull down-seq)方法来鉴定目标RNN是否与某些RNA分子相互作用,通过Western blot(pull down-WB)实验和质谱(pull down-MS)技术检测目标RNA是否与某些蛋白相互作用。 二、实验流程图
图 RNA Pull-down流程图 服务流程 服务流程 客户在线下单——订单/实验材料确认——样品预处理——生物素探针标记RNA——RNA抽提——细胞裂解——磁珠富集RNA——RNA结合蛋白孵育——RNA结合蛋白洗脱——Western blot或LC-MS/MS检测——出具实验报告 服务内容及说明 服务内容及说明 适用范围 1、验证已知RNA与蛋白的...
DNA Pull down实验是用脱硫生物素标记特异性DNA探针,脱硫生物素探针可以和偶联在磁珠上的链霉亲和素亲和结合。提取物与磁珠-DNA探针孵育,作用蛋白质分子可以和DNA探针特异性结合;经过洗涤可以将非特异性结合蛋白质去除;用 Western Blot或质谱对产物进行检测分析。