2.Journal of Experimental & Clinical Cancer Research|RNA dot blot 检测发现与 LNCaP 细胞相比,LNCaP-AI 和 C4-2 细胞中 mRNA 内的 m7 G 修饰水平更丰富 图源:Journal of Experimental & Clinical Cancer Research 图片分为两个 (A) 和 (B) 两部分...
16,用ddH2O清洗至背景大致干净即可,约30-60s 17,白光成像采集亚甲蓝染色后的图像作为负载对照。
1.将已知浓度的样本样品，用无酶离心管进行梯度稀释（并上操作）2.短暂离心，然后将RNA样品95℃加热3分钟，结束后迅速转到冰上冷却，防止重新形成二级结构。3.用1ml枪头粗端在NC膜上留下圆形印痕并用铅笔描圈，以引导加样，并将 NC膜裁剪成合适的尺寸，转移至干净的培养皿中。4.取2μl RNA样品按顺序滴在NC...
普拉特泽生物分子检测平台长期为大家提供Dot Blot实验外包服务,以RNA为例将Dot Blot实操步骤分享给大家,一起学习吧! 一、RNA乙酰化Dot Blot实操步骤 1、实验准备 仪器准备:超微量核酸分析仪、紫外交联仪、水平脱色摇床、化学发光仪、超净工作台、微量移液器、电热恒温鼓风干燥箱、-80℃超低温冰箱、移液器、台式高...
根据Abcam官网提供的RNA dot bloting protocol,进行实验在实验过程中适当更改实验条件,形成实验笔记。 RNA dot blot 一、试剂 RNA样本 无RNase水 TBST(1x TBS,0.1% Tween-20) 封闭液一抗 二抗(山羊抗兔 IgG-HRP, ab97051, 或山羊抗小鼠 IgG-HRP)
1、将已知浓度的样本样品,用无酶离心管进行梯度稀释(并上操作) 2、短暂离心,然后将RNA样品95℃加热3分钟,结束后迅速转到冰上冷却,防止 重新形成二级结构。 3、用1ml枪头粗端在NC膜上留下圆形印痕并用铅笔描…
RNA Dot blot 实验流程 1、将已知浓度的样本样品,用无酶离心管进行梯度稀释(并上操作) 2、短暂离心,然后将RNA样品95℃加热3分钟,结束后迅速转到冰上冷却,防止 重新形成二级结构。 3、用1ml枪头粗端在NC膜上留下圆形印痕并用铅笔描圈,以引导加样,并将 NC膜裁剪成合适的尺寸,转移至干净的培养皿中。
注意枪头不要碰膜。5. 干燥后，进行RNA与膜的交联。6. 清洗膜，洗去未结合的RNA。7. 孵育一抗，然后进行TBST清洗。8. 孵育二抗，再进行TBST清洗。9. 孵育ECL显影液。10. 显影仪下拍照，然后进行亚甲蓝染色。11. 清洗膜并采集图像。参考资料：RNA Dot Blot Protocol | Abcam ...
抗原抗体与受体配体结合被利用做蛋白质。此原理是受体抗原抗体和受体配体结合被利用做蛋白质的简单定量分析。被吸附在96孔板底部的抗原抗体或者受体配体可以被标记的抗体识别，并进行定量计数形成定量分析的基础。由于培养细胞需要不断监测，所以工作量很大。快速简洁的定量分析是监测细胞表达水平监测的重要手段。
总RNA/mRNA m6A/ac4C定量检测(Dot Blot法) 在斑点杂交中,要检测到的生物分子不是首先通过电泳分离出来的,相反,将含有被检测分子的混合物直接点在膜上,烘烤固定。然后与m6A或Ac4C抗体(Western blot)杂交后检测,步骤如下: (1)交联:在65℃下5分钟,使mRNA变性以破坏RNA中的二级结构。变性后立即在冰上冷却,以防止...