目的构建PML-RARα融合基因相关重组表达质粒,在大肠埃希菌中表达可溶性蛋白并进行纯化。 方法利用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)以PML-RARα全长质粒为模板分别扩增出长度均为1 200 bp的PML和RARα序列,并将它们分别插入PET32a(+)质粒中,构建重组表达质粒,化学法转化大肠埃希菌DH5α进行克隆,菌落PCR筛...
结论:APL致病性蛋白PML-RARα的表达促进自噬相关蛋白LC3-Ⅱ累积,GFP-LC3聚集以及自噬体形成,提示该融合蛋白具有增强细胞自噬活性的功能,并以on-rate increase方式进行,而该效应可以被自噬特异性抑制剂3-MA所拮抗.本研究不仅拓展PML-RARα的功能研究,而且将在较大程度上推动对白血病细胞自噬活性调控的认识,同时对于认识...
免疫荧光动态监测急性早幼粒细胞白血病患者PML-RARα融合蛋白变化
本发明属医学领域,具体涉及一种热处理诱导pml/rarα融合蛋白及其三氧化二砷耐药突变体的溶性改变和降解方法,是利用相对温和的热休克诱导pml/rarα融合蛋白溶性改变及降解,从而将此方法用于临床治疗apl病人。 背景技术: 急性早幼粒细胞白血病(acutepromyelocyticleukemia,apl)是急性髓系白血病(acutemyelocyticleukemia,aml)的一...
为研究PML RARα及RARα融合蛋白在三硫化二砷 (As2 S3 )诱导的人早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞凋亡中的作用 ,本研究应用细胞形态观察、流式细胞术测定及DNA电泳等方法观察三硫化二砷对NB4细胞的诱导凋亡作用 ,用染色体G显带技术、反转录PCR及Western印迹测定这一过程中PML RARα融合基因及其表达产物、野生型RARα...
硒化壳聚糖通过下调PML-RARα融合蛋白来对NB4 细胞产生抑制增殖和诱导凋亡作用 作者:**恒,曹凤军,蔡晓军,许涛,邓守平,陈萍 【摘要】目的研究硒化壳聚糖对急性早幼粒白血病细胞株NB4增殖和凋亡的 影响,探讨这种影响与PML-RARα融合蛋白表达的关系。方法应用MTT法检测 硒化壳聚糖对细胞增殖的影响,应用AO/EB荧光染色法...
出凝血异常是以PML/RARα融合蛋白为主要病因的急性早幼粒细胞白血病(APL)的临床特征之一和重要致死原因。组织因子(TF)在APL细胞上的表达异常增高是其特征性出血的主因。前期实验在PR9细胞中证实PML/RARα融合蛋白通过非直接作用于TF启动子而上调TF表达,并定位了其作用序列。而在真正的APL细胞中PML/RARα融合蛋白是否...
背景:实时定量RT-PCR 只能间接地反映融合基因表达量的变化,并不能在细胞原位直观反映急性早幼粒细胞白血病患者细胞内PML-RARα融合蛋白在全反式维甲酸治疗前后的相对表 达量.目的:探讨免疫荧光技术检测融合蛋白PML-R...
摘要 本发明提供一种诱导PML/RARα融合蛋白及其突变体溶性改变和降解的方法,通过热休克诱导野生型以及砷剂耐药的PML/RARα融合蛋白溶性转变从而促使其降解。本发明方法跟传统的化疗或者三氧化二砷以及全反式维甲酸相比,解决了APL治疗领域的最大难题,既可诱导As2O3耐药PML/RARα突变体蛋白的溶性转变从而促使其降解而且...