他们通过反相离子对高效液相色谱（IP-RP HPLC）鉴定出脂质与mRNA发生加合反应生成的一类杂质，这种杂质通过常规mRNA分析手段无法检测到，由源自可电离阳离子脂质的降解成分添加到碱基或者核糖上引起。
他们通过反相离子对高效液相色谱(IP-RP HPLC)鉴定出脂质与mRNA发生加合反应生成的一类杂质,这种杂质通过常规mRNA分析手段无法检测到,由源自可电离阳离子脂质的降解成分添加到碱基或者核糖上引起。
由于加合脂质的大小疏水性不同,mRNA-脂质加合物在IP-RP HPLC 色谱图上呈现出不同的保留时间。将七个不同批次的相同可电离脂质与mRNA进行混合制备,在IP-RP HPLC 色谱图上不同批次的LP丰度存在差异,这说明加合反应可能是由可电离脂质的杂质驱动的,而不是脂质本身的化学反应性。通过高反应性可电离脂质,了解完整加...
由于加合脂质的大小疏水性不同,mRNA-脂质加合物在IP-RP HPLC 色谱图上呈现出不同的保留时间。将七个不同批次的相同可电离脂质与mRNA进行混合制备,在IP-RP HPLC 色谱图上不同批次的LP丰度存在差异,这说明加合反应可能是由可电离脂质的杂质驱动的,而不是脂质本身的化学反应性。通过高反应性可电离脂质,了解完整加...
将mRNA与LNP组分(可电离的阳离子脂质、聚乙二醇PEG脂质、甾醇和磷酸胆碱)组合反应,发现仅在含有可电离脂质的制剂组分中可检测LP组分,并且不受其他脂质存在的影响。从mRNA-可电离脂质二元组合中提取到的mRNA与mRNA-LNP中提取出的mRNA具有相同的IP-RP HPLC 色谱图,说明在二元简化系统中发生了与LNP中相同的化学反应。
RP-IP HPLC检测显示所有组都有一定程度的mRNA降解,随着环境温度的升高,mRNA完整性损失的百分比逐渐增加。在两种获批的COVID-19 mRNA疫苗中,数据显示Moderna疫苗在-20°C下稳定6个月,Pfizer-BioNTech疫苗在-80～-60°C下稳定6个月。然而,在2-8°C下储存时,Moderna和Pfizer-BioNTech疫苗的保质期迅速缩短至30天和5...
IP-RP-HPLC法定量测定mRNA 5’帽 RP-HPLC法测定聚(A)尾RNA的百分比 凝胶电泳检测mRNA的完整性 纯度免疫印迹法检测dsRNA 残余DNA模板(qPCR) 如欲了解上述方法详细步骤可在评论留邮箱,将通过邮箱发送USP指南草案。 笔者点评:mRNA疫苗或治疗产品研发投产过程中的一大难点就是各个关键步骤质控的分析和测试。2020年8月,...
在配方设计、临床评估和商业化过程中,通过使用适当的RP-IP HPLC方法来检测这些信使核糖核酸脂质加合物的形成,以确保信使核糖核酸的完整性没有损失是必要的。 mRNA产品生产及检测流程 图源:USP《mRNA 疫苗质量的分析程序指南草案第二版》 导致mRNA制剂稳定性较差的因素是多样而复杂的,由于多种脂质成之份间复杂的相互...
图3. IVT 和 DS 纯化工艺以及生产 DNA 模板的上游工艺。首字母缩略词:IP RP HPLC = 离子对反相高效液相色谱;IEX = 离子交换层析;AC = 亲和层析法;TFF = 切向流过滤。 mRNA DS 生产平台 RNA的化学合成 RNA 的化学合成是一个自动化的循环过程,可实现连续的RNA 合成,被...
图4 加帽率液相检测结果(IP-RP-HPLC) PolyA 3' polyA尾也对mRNA的翻译效率有显著影响,其检测方法与加帽率原理类似,也是使用工具酶酶切后纯化得到3’mRNA片段,使用质谱、液相或毛细管电泳仪进行分析,健新原力分析平台配备这三大基础设备,可实现polyA的单碱基分辨率分析。